蓝舌病病毒8型VP2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定
람설병병독8형VP2단백단극륭항체적제비급기항원표위감정
Preparation of the monoclonal antibodies against VP2 protein of bluetongue virus serotype 8 and the VP2 B-cell epitope identification
  • 万方数据
    中国预防兽医学报 중국예방수의학보
    CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
    2014年 4期 318-322 ,共5页

    席娜%赵国辉%孙恩成%秦永丽%孙亮%魏天%徐青元%杨涛%孙晶

    석나%조국휘%손은성%진영려%손량%위천%서청원%양도%손정

    蓝舌病病毒8型%VP2蛋白%真核表达%单克隆抗体%抗原表位 藍舌病病毒8型%VP2蛋白%真覈錶達%單剋隆抗體%抗原錶位
    람설병병독8형%VP2단백%진핵표체%단극륭항체%항원표위
    bluetongue virus serotype 8%VP2 protein%eukaryotic expression%monoclonal antibody%antigen epitopes
    为制备蓝舌病病毒(BTV)8型VP2蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究采用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达并纯化的重组VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以纯化的重组VP2蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出两株能够稳定分泌抗BTV8VP2蛋白的MAbs杂交瘤细胞株(2G4和3B7).间接免疫荧光结果表明:2G4和3B7与BTV8均呈阳性反应,与BTV1～7、BTV9～24、茨城病毒、中山病毒以及赤羽病毒均呈阴性反应.Western blot结果显示,2G4和3B7均能够识别BTV8及BTV8重组VP2蛋白.Ig亚类鉴定2G4和3B7均为IgG1/κ链.利用原核表达的96条覆盖VP2全长的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAbs的抗原表位进行鉴定,结果表明:MAb 2G4识别的抗原表位为281LCRLLSTIGRKMCNTE26.本研究结果为BTV8型特异性检测方法的建立及VP2蛋白结构和功能的研究奠定了基础.
    위제비람설병병독(BTV)8형VP2단백적단극륭항체(MAb)급감정기항원표위,본연구채용Bac-to-Bac곤충간상병독표체계통표체병순화적중조VP2단백면역BALB/c소서,삼면후취소서비림파세포여SP2/0세포진행융합,병이순화적중조VP2단백위포피항원,통과간접ELISA사선출량주능구은정분비항BTV8VP2단백적MAbs잡교류세포주(2G4화3B7).간접면역형광결과표명:2G4화3B7여BTV8균정양성반응,여BTV1～7、BTV9～24、자성병독、중산병독이급적우병독균정음성반응.Western blot결과현시,2G4화3B7균능구식별BTV8급BTV8중조VP2단백.Ig아류감정2G4화3B7균위IgG1/κ련.이용원핵표체적96조복개VP2전장적맥아당결합단백(MBP)융합단태대MAbs적항원표위진행감정,결과표명:MAb 2G4식별적항원표위위281LCRLLSTIGRKMCNTE26.본연구결과위BTV8형특이성검측방법적건립급VP2단백결구화공능적연구전정료기출.
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