中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
4期
297-300
,共4页
潘福星%王冬冬%曹志伟%冯培祥%刘宏%齐娟%孙忠晟%王祖荣%尹燕博
潘福星%王鼕鼕%曹誌偉%馮培祥%劉宏%齊娟%孫忠晟%王祖榮%尹燕博
반복성%왕동동%조지위%풍배상%류굉%제연%손충성%왕조영%윤연박
SYBR Green Ⅰ%买时荧光定量RT-PCR%比格犬%α-干扰素%β-干扰素
SYBR Green Ⅰ%買時熒光定量RT-PCR%比格犬%α-榦擾素%β-榦擾素
SYBR Green Ⅰ%매시형광정량RT-PCR%비격견%α-간우소%β-간우소
SYBR Green Ⅰ%real-time fluorescent quantitative RT-PCR%Beagles%IFN-α%IFN-β
为检测比格犬α和β-干扰素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根据GenBank中登录的IFN-α和IFN-β基因序列,分别设计合成特异性引物,以犬3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH) mRNA为内参,建立SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法.通过RT-PCR分别扩增IFN-α、IFN-β和GAPDH的基因片段,并克隆于pMD19-T载体中制备标准品,建立荧光定量RT-PCR标准曲线.结果表明:IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×102拷贝/μL～1×108拷贝/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.994.组内组间变异系数均小于3％,特异性和重复性较好.同时采用常规RT-PCR方法与本研究建立的方法对30份临床样品检测,结果显示IFN-α和IFN-β的阳性符合率分别为96.43％和96.55％.本研究建立的检测方法为比格犬IFN mRNA的定量分析提供了有效手段.
為檢測比格犬α和β-榦擾素(CaIFN-α和CaIFN-β),本研究根據GenBank中登錄的IFN-α和IFN-β基因序列,分彆設計閤成特異性引物,以犬3-燐痠甘油脫氫酶(GAPDH) mRNA為內參,建立SYBR Green Ⅰ熒光定量RT-PCR檢測方法.通過RT-PCR分彆擴增IFN-α、IFN-β和GAPDH的基因片段,併剋隆于pMD19-T載體中製備標準品,建立熒光定量RT-PCR標準麯線.結果錶明:IFN-α和IFN-β和GAPDH基因的Ct值與標準品稀釋度在1×102拷貝/μL～1×108拷貝/μL內均呈良好的線性關繫,相關繫數均大于0.994.組內組間變異繫數均小于3％,特異性和重複性較好.同時採用常規RT-PCR方法與本研究建立的方法對30份臨床樣品檢測,結果顯示IFN-α和IFN-β的暘性符閤率分彆為96.43％和96.55％.本研究建立的檢測方法為比格犬IFN mRNA的定量分析提供瞭有效手段.
위검측비격견α화β-간우소(CaIFN-α화CaIFN-β),본연구근거GenBank중등록적IFN-α화IFN-β기인서렬,분별설계합성특이성인물,이견3-린산감유탈경매(GAPDH) mRNA위내삼,건립SYBR Green Ⅰ형광정량RT-PCR검측방법.통과RT-PCR분별확증IFN-α、IFN-β화GAPDH적기인편단,병극륭우pMD19-T재체중제비표준품,건립형광정량RT-PCR표준곡선.결과표명:IFN-α화IFN-β화GAPDH기인적Ct치여표준품희석도재1×102고패/μL～1×108고패/μL내균정량호적선성관계,상관계수균대우0.994.조내조간변이계수균소우3％,특이성화중복성교호.동시채용상규RT-PCR방법여본연구건립적방법대30빈림상양품검측,결과현시IFN-α화IFN-β적양성부합솔분별위96.43％화96.55％.본연구건립적검측방법위비격견IFN mRNA적정량분석제공료유효수단.
