CAJ | 학술논문

为提高猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)弱毒疫苗的免疫效果,本研究以高致病性PRRS弱毒疫苗株HuN4-F112感染性分子克隆为基础,在NSP2区域删除了110个氨基酸,将猪源GM-CSF基因和PRRSV ORF6转录引导序列(TRS6)通过融合PCR方法插入HuN4-F 112疫苗株的ORF1b和ORF2a之间,构建了全长重组质粒pHN4-△110-GM-CSF.将该重组质粒采用Swa Ⅰ酶切线性化,经体外转录病毒基因组RNA后转染BHK-21细胞,然后在Marc-145细胞中进行病毒拯救及传代.结果显示重组病毒感染Marc-145细胞可以引起明显的细胞病变;经RT-PCR、DNA测序、Mlu Ⅰ酶切鉴定和免疫荧光鉴定结果显示,救获的重组PRRSV含有GM-CSF基因并能够有效表达,将其命名为rHN4-△110-GM-CSF.生物学特性分析表明重组病毒与亲本病毒在Marc-145细胞中具有相似的生长特性,插入的外源基因具有良好的遗传稳定性.由于GM-CSF能够活化树突状细胞,是一种良好的免疫佐剂.该重组病毒的构建为动物体内免疫保护攻毒试验评价奠定了基础.
위제고저번식여호흡장애종합정(PRRS)약독역묘적면역효과,본연구이고치병성PRRS약독역묘주HuN4-F112감염성분자극륭위기출,재NSP2구역산제료110개안기산,장저원GM-CSF기인화PRRSV ORF6전록인도서렬(TRS6)통과융합PCR방법삽입HuN4-F 112역묘주적ORF1b화ORF2a지간,구건료전장중조질립pHN4-△110-GM-CSF.장해중조질립채용Swa Ⅰ매절선성화,경체외전록병독기인조RNA후전염BHK-21세포,연후재Marc-145세포중진행병독증구급전대.결과현시중조병독감염Marc-145세포가이인기명현적세포병변;경RT-PCR、DNA측서、Mlu Ⅰ매절감정화면역형광감정결과현시,구획적중조PRRSV함유GM-CSF기인병능구유효표체,장기명명위rHN4-△110-GM-CSF.생물학특성분석표명중조병독여친본병독재Marc-145세포중구유상사적생장특성,삽입적외원기인구유량호적유전은정성.유우GM-CSF능구활화수돌상세포,시일충량호적면역좌제.해중조병독적구건위동물체내면역보호공독시험평개전정료기출.