CAJ | 학술논문

目的：建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法。方法：根据马尔尼菲青霉ITS序列，设计并合成引物，通过常规PCR扩增目标序列后，将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中，转化大肠杆菌JM109，经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线，得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式，并做灵敏性、特异性试验。结果：荧光定量PCR 标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系，溶解曲线特异，相关系数为1.938，最低检测的拷贝数为8.5个/反应管。结论：建立了检测马尔尼菲青霉病的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法，为该病的早期诊断及定量分析感染程度及对治疗的指示作用奠定了良好的基础。
목적：건립일충쾌속、은정、령민차가정량적검측마이니비청매병적SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR방법。방법：근거마이니비청매ITS서렬，설계병합성인물，통과상규PCR확증목표서렬후，장감정정학적목적기인편단극륭입pGEM-T재체중，전화대장간균JM109，경PCR급측서감정후득도양성중조질립，작위표준품모판건립SYBR Green Ⅰ형광정량PCR표준곡선화용해곡선，득출고패수여순배역치지간적선성관계곡선표체식，병주령민성、특이성시험。결과：형광정량PCR 표준곡선역치여모판농도정량호적선성관계，용해곡선특이，상관계수위1.938，최저검측적고패수위8.5개/반응관。결론：건립료검측마이니비청매병적SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR방법，위해병적조기진단급정량분석감염정도급대치료적지시작용전정료량호적기출。