中国药业
中國藥業
중국약업
CHINA PHARMACEUTICALS
2014年
7期
22-24
,共3页
黄炯威%莫世艺%刘宁%梁剑锋%刘桂祯
黃炯威%莫世藝%劉寧%樑劍鋒%劉桂禎
황형위%막세예%류저%량검봉%류계정
核苷磷酸化酶%基因工程菌%发酵%优化
覈苷燐痠化酶%基因工程菌%髮酵%優化
핵감린산화매%기인공정균%발효%우화
nucleoside%phosphorylase%gene%engineering%bacteria%fermentation%optimization
目的 优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵表达条件.方法 通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝(Bradford)法测定蛋白,SDS-PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50 L发酵罐发酵条件.结果 摇瓶培养起始pH为7.0～7.2,于30℃培养4h,加入终浓度为0.4 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导8h后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量.50 L发酵罐的最佳条件为起始pH为7.0～7.2,于32℃培养4h,加入终浓度为0.4 mmol/L的IPTG诱导9h后收获菌体,每升发酵液可得2 g以上的酶蛋白.结论 基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产,为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础.
目的 優化覈苷燐痠化酶(包括嘌呤和嘧啶覈苷燐痠化酶)基因工程菌的髮酵錶達條件.方法 通過工程菌搖瓶培養,測定吸光度D值,攷馬斯亮藍(Bradford)法測定蛋白,SDS-PAGE電泳和凝膠成像掃描分析錶達量,優化錶達條件;通過正交試驗優化50 L髮酵罐髮酵條件.結果 搖瓶培養起始pH為7.0～7.2,于30℃培養4h,加入終濃度為0.4 mmol/L的異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導8h後收穫菌體,可得到較高的生物量和重組酶蛋白錶達量.50 L髮酵罐的最佳條件為起始pH為7.0～7.2,于32℃培養4h,加入終濃度為0.4 mmol/L的IPTG誘導9h後收穫菌體,每升髮酵液可得2 g以上的酶蛋白.結論 基因工程菌髮酵錶達覈苷燐痠化酶產量較高,可工業化生產,為酶法閤成覈苷痠類似物的研究奠定瞭基礎.
목적 우화핵감린산화매(포괄표령화밀정핵감린산화매)기인공정균적발효표체조건.방법 통과공정균요병배양,측정흡광도D치,고마사량람(Bradford)법측정단백,SDS-PAGE전영화응효성상소묘분석표체량,우화표체조건;통과정교시험우화50 L발효관발효조건.결과 요병배양기시pH위7.0～7.2,우30℃배양4h,가입종농도위0.4 mmol/L적이병기류대반유당감(IPTG)유도8h후수획균체,가득도교고적생물량화중조매단백표체량.50 L발효관적최가조건위기시pH위7.0～7.2,우32℃배양4h,가입종농도위0.4 mmol/L적IPTG유도9h후수획균체,매승발효액가득2 g이상적매단백.결론 기인공정균발효표체핵감린산화매산량교고,가공업화생산,위매법합성핵감산유사물적연구전정료기출.
