国际药学研究杂志
國際藥學研究雜誌
국제약학연구잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACEUTICAL RESEARCH
2014年
2期
200-205
,共6页
佟艳华%赵太云%吴宁%李锦
佟豔華%趙太雲%吳寧%李錦
동염화%조태운%오저%리금
μ阿片受体%Ⅰ型咪唑受体%PC12细胞%稳定表达%阿片成瘾
μ阿片受體%Ⅰ型咪唑受體%PC12細胞%穩定錶達%阿片成癮
μ아편수체%Ⅰ형미서수체%PC12세포%은정표체%아편성은
mu opioid receptors%Ⅰ 1-imidazoline receptor%PC12 cells%stable expression%opioid addiction
目的 建立具有神经元特性的稳定表达大鼠μ阿片受体(rat mu-opioid receptor,rMOR)的PC12细胞模型.方法 构建慢病毒表达载体pBPLV-rMOR-eGFP,包装病毒,并将包装好的慢病毒感染PC12细胞,流式细胞分选术结合有限稀释法筛选稳定表达rMOR的PC12细胞.以放射性配体受体结合实验检测表达受体的亲和力及表达水平,用cAMP超射分析在PC12细胞中表达的rMOR的功能特征及胍丁胺抗吗啡依赖的检测.结果 病毒感染细胞后,可见明显的荧光蛋白表达.单克隆扩大培养后,细胞生长正常.3 H-二丙诺啡与PC12-rMOR细胞中的rMOR蛋白有较好的亲和力,Kd值为(0.51±0.07)nmol/L,Bmax值为(1.58 ±0.15) pmol/mg;吗啡20 μmol/L慢性处理24h,纳洛酮10 μmol/L急性催促15 min引起cAMP升高(255 ±25.2)％,这一效应能被外源性胍丁胺剂量依赖性逆转.结论 成功建立了无α2肾上腺受体干扰、具有神经元特征、MOR与Ⅰ型咪唑啉受体稳定共表达的细胞模型,为吗啡成瘾神经分子机制及胍丁胺激活Ⅰ型咪唑啉受体抗阿片成瘾的神经分子机制研究提供良好的体外细胞研究模型.
目的 建立具有神經元特性的穩定錶達大鼠μ阿片受體(rat mu-opioid receptor,rMOR)的PC12細胞模型.方法 構建慢病毒錶達載體pBPLV-rMOR-eGFP,包裝病毒,併將包裝好的慢病毒感染PC12細胞,流式細胞分選術結閤有限稀釋法篩選穩定錶達rMOR的PC12細胞.以放射性配體受體結閤實驗檢測錶達受體的親和力及錶達水平,用cAMP超射分析在PC12細胞中錶達的rMOR的功能特徵及胍丁胺抗嗎啡依賴的檢測.結果 病毒感染細胞後,可見明顯的熒光蛋白錶達.單剋隆擴大培養後,細胞生長正常.3 H-二丙諾啡與PC12-rMOR細胞中的rMOR蛋白有較好的親和力,Kd值為(0.51±0.07)nmol/L,Bmax值為(1.58 ±0.15) pmol/mg;嗎啡20 μmol/L慢性處理24h,納洛酮10 μmol/L急性催促15 min引起cAMP升高(255 ±25.2)％,這一效應能被外源性胍丁胺劑量依賴性逆轉.結論 成功建立瞭無α2腎上腺受體榦擾、具有神經元特徵、MOR與Ⅰ型咪唑啉受體穩定共錶達的細胞模型,為嗎啡成癮神經分子機製及胍丁胺激活Ⅰ型咪唑啉受體抗阿片成癮的神經分子機製研究提供良好的體外細胞研究模型.
목적 건립구유신경원특성적은정표체대서μ아편수체(rat mu-opioid receptor,rMOR)적PC12세포모형.방법 구건만병독표체재체pBPLV-rMOR-eGFP,포장병독,병장포장호적만병독감염PC12세포,류식세포분선술결합유한희석법사선은정표체rMOR적PC12세포.이방사성배체수체결합실험검측표체수체적친화력급표체수평,용cAMP초사분석재PC12세포중표체적rMOR적공능특정급고정알항마배의뢰적검측.결과 병독감염세포후,가견명현적형광단백표체.단극륭확대배양후,세포생장정상.3 H-이병낙배여PC12-rMOR세포중적rMOR단백유교호적친화력,Kd치위(0.51±0.07)nmol/L,Bmax치위(1.58 ±0.15) pmol/mg;마배20 μmol/L만성처리24h,납락동10 μmol/L급성최촉15 min인기cAMP승고(255 ±25.2)％,저일효응능피외원성고정알제량의뢰성역전.결론 성공건립료무α2신상선수체간우、구유신경원특정、MOR여Ⅰ형미서람수체은정공표체적세포모형,위마배성은신경분자궤제급고정알격활Ⅰ형미서람수체항아편성은적신경분자궤제연구제공량호적체외세포연구모형.
