现代检验医学杂志
現代檢驗醫學雜誌
현대검험의학잡지
JOURNAL OF MODERN LABORATORY MEDICINE
2014年
5期
23-27
,共5页
王亚文%刘希%惠凌云%巩辉%张琳%马列婷%韩水平%王全颖%杨广笑%刘正稳
王亞文%劉希%惠凌雲%鞏輝%張琳%馬列婷%韓水平%王全穎%楊廣笑%劉正穩
왕아문%류희%혜릉운%공휘%장림%마렬정%한수평%왕전영%양엄소%류정은
鸭乙肝病毒核心抗原%免疫组织化学%Image-Pro Plus 6.0软件%定量检测
鴨乙肝病毒覈心抗原%免疫組織化學%Image-Pro Plus 6.0軟件%定量檢測
압을간병독핵심항원%면역조직화학%Image-Pro Plus 6.0연건%정량검측
duck hepatitis B virus core antigen (DHBcAg)%immunohistochemistry%Image-Pro Plus 6.0 software%quantitative assay
目的：建立鸭肝组织中鸭乙肝病毒核心抗原（DHBcAg）表达水平定量的免疫组织化学方法。方法比较热修复、微波修复、胃蛋白酶修复和不修复四种不同抗原修复方法的免疫组化检测技术，建立 DHBcAg抗原修复的最佳方案。采用Image-Pro Plus 6.0软件，设置优化图像采集参数，通过扣除空白区域的面积计算二氨基联苯胺（DAB）黄染的平均光密度（MD），客观评价不同切片中阳性表达的程度。采用该方法对 DHBV感染的鸭肝组织中 DHBcAg表达水平进行定量，评价DHBcMAb-TAT PTD穿膜抗体的抗病毒作用。结果抗原不修复的方式进行 DHBcAg免疫组化染色优于其他三种抗原修复的方法。建立优化的图像采集参数，进行DHBcAg抗原表达的 MD值计算。比较受试麻鸭治疗前后肝组织中DHBcAg的 MD差值，结果显示随着DHBcMAb-TAT PTD穿膜抗体给药剂量的增加，鸭肝细胞内 DHBcAg的表达逐渐降低，存在明显剂量依赖关系。表明该方法可有效评价药物对DHBcAg的影响。结论建立DHBcAg抗原不修复的定量免疫组织化学方法可以更加客观、准确的评价DHBcAg表达水平。
目的：建立鴨肝組織中鴨乙肝病毒覈心抗原（DHBcAg）錶達水平定量的免疫組織化學方法。方法比較熱脩複、微波脩複、胃蛋白酶脩複和不脩複四種不同抗原脩複方法的免疫組化檢測技術，建立 DHBcAg抗原脩複的最佳方案。採用Image-Pro Plus 6.0軟件，設置優化圖像採集參數，通過釦除空白區域的麵積計算二氨基聯苯胺（DAB）黃染的平均光密度（MD），客觀評價不同切片中暘性錶達的程度。採用該方法對 DHBV感染的鴨肝組織中 DHBcAg錶達水平進行定量，評價DHBcMAb-TAT PTD穿膜抗體的抗病毒作用。結果抗原不脩複的方式進行 DHBcAg免疫組化染色優于其他三種抗原脩複的方法。建立優化的圖像採集參數，進行DHBcAg抗原錶達的 MD值計算。比較受試痳鴨治療前後肝組織中DHBcAg的 MD差值，結果顯示隨著DHBcMAb-TAT PTD穿膜抗體給藥劑量的增加，鴨肝細胞內 DHBcAg的錶達逐漸降低，存在明顯劑量依賴關繫。錶明該方法可有效評價藥物對DHBcAg的影響。結論建立DHBcAg抗原不脩複的定量免疫組織化學方法可以更加客觀、準確的評價DHBcAg錶達水平。
목적：건립압간조직중압을간병독핵심항원（DHBcAg）표체수평정량적면역조직화학방법。방법비교열수복、미파수복、위단백매수복화불수복사충불동항원수복방법적면역조화검측기술，건립 DHBcAg항원수복적최가방안。채용Image-Pro Plus 6.0연건，설치우화도상채집삼수，통과구제공백구역적면적계산이안기련분알（DAB）황염적평균광밀도（MD），객관평개불동절편중양성표체적정도。채용해방법대 DHBV감염적압간조직중 DHBcAg표체수평진행정량，평개DHBcMAb-TAT PTD천막항체적항병독작용。결과항원불수복적방식진행 DHBcAg면역조화염색우우기타삼충항원수복적방법。건립우화적도상채집삼수，진행DHBcAg항원표체적 MD치계산。비교수시마압치료전후간조직중DHBcAg적 MD차치，결과현시수착DHBcMAb-TAT PTD천막항체급약제량적증가，압간세포내 DHBcAg적표체축점강저，존재명현제량의뢰관계。표명해방법가유효평개약물대DHBcAg적영향。결론건립DHBcAg항원불수복적정량면역조직화학방법가이경가객관、준학적평개DHBcAg표체수평。
Objective To develop a quantitative immunohistochemistry assay for duck hepatitis B virus core antigen (DHB-cAg)in duck liver tissue.Methods By comparison with no repair antigen and repair antigen with high pressure,microwave and trypsin,the best solution of antigen retrieval was determined.By optimizing the parameter of image acquisition and de-ducting blank area,mean density of yellow areas was calculated using Image-Pro Plus 6.0 software.Using the assay devel-oped to determine the level of DHBcAg in liver tissue from duck infected by DHBV,anti-DHBV activity of DHBcMAb-TAT PTD conj ugate was examined.Results SABC method with no repair antigen was selected,which was better than other methods.DHBcAg expression in duck liver tissue could be objectively and accurately quantified by setting Image-Pro Plus 6.0 software parameters and calculating mean density of yellow areas.By comparison with the differences between mean densityat baseline of treatment and end of treatment,it was showed that DHBcMAb-TATPTD conjugate treatment dose-de-pendently reduced the levels of DHBcAg in liver tissue,which show that the assay developed could effectively evaluate the anti-DHBV activity of agent.Conclusion The immunohistochemistry assay developed in this study can objectively and accu-rately evaluate the level of DHBcAg in duck liver tissue.
