CAJ | 학술논문

目的：柚皮素重要的生理活性使其具有广泛的开发应用前景。文中探讨不同剂量柚皮素对人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响及其相关作用机制。方法 MTT法检测不同剂量柚皮素（0、0．005、0．01、0．02、0．04、0．06、0．08、0．1、0．2、0．4、0．8 mg/mL）作用CNE2细胞不同时间（24、48、72 h）对其细胞生长率的影响；流式细胞仪检测不同剂量柚皮素（0、0．02、0．04 mg/mL ）作用 CNE2细胞48 h 对其细胞周期的影响；采用 Hochest 33258荧光染色观察不同剂量柚皮素（0、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡形态的变化；采用Annexin V-FITC流式细胞术检测不同剂量柚皮素（0、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对其细胞凋亡率的影响；采用2，7-二氯乙酰乙酸（2，7-dichloro fluorescein diacetate ， DCFH-DA）荧光探针检测不同剂量柚皮素（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48h对其细胞内活性氧簇（reactive oxygen spe-cies， ROS）的变化；采用实时荧光定量PCR法（ real-tmie fluorescence quantitative PCR ， qPCR）检测不同剂量柚皮素（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2细胞48 h对C-fos、Bax及Bcl-2基因mRNA表达水平的变化。结果与对照组相比，0．02、0．04 mg/mL柚皮素能引发CNE2细胞内ROS含量低水平升高，ROS的MFI分别为5186±183．50、5508±155．37，差异有统计学意义（P＜0．05），由此诱导细胞增殖调控基因C-fos表达，差异有统计学意义（P＜0．05或P＜0．01），加速细胞周期运转，促进CNE2细胞分裂增殖；而0．2、0．4 mg/mL柚皮素则能引发ROS大量产生，ROS的MFI分别为10758±179．82、11241±114．45，差异有统计学意义（P＜0．01），由此诱导促凋亡基因Bax及抑制抗凋亡基因Bcl-2表达，促进CNE2细胞凋亡，差异有统计学意义（P＜0．01），有效抑制CNE2细胞增殖。结论在0．005～0．8 mg/mL剂量范围，柚皮素对CNE2细胞生长具有双向调节作用，相对较低剂量体现为一定的促癌活性，相对较高剂量则体现为强烈的抑癌活性。目的：柚皮素重要的生理活性使其具有廣汎的開髮應用前景。文中探討不同劑量柚皮素對人鼻嚥癌CNE2細胞生長的影響及其相關作用機製。方法 MTT法檢測不同劑量柚皮素（0、0．005、0．01、0．02、0．04、0．06、0．08、0．1、0．2、0．4、0．8 mg/mL）作用CNE2細胞不同時間（24、48、72 h）對其細胞生長率的影響；流式細胞儀檢測不同劑量柚皮素（0、0．02、0．04 mg/mL ）作用 CNE2細胞48 h 對其細胞週期的影響；採用 Hochest 33258熒光染色觀察不同劑量柚皮素（0、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2細胞48 h對其細胞凋亡形態的變化；採用Annexin V-FITC流式細胞術檢測不同劑量柚皮素（0、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2細胞48 h對其細胞凋亡率的影響；採用2，7-二氯乙酰乙痠（2，7-dichloro fluorescein diacetate ， DCFH-DA）熒光探針檢測不同劑量柚皮素（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2細胞48h對其細胞內活性氧簇（reactive oxygen spe-cies， ROS）的變化；採用實時熒光定量PCR法（ real-tmie fluorescence quantitative PCR ， qPCR）檢測不同劑量柚皮素（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）作用CNE2細胞48 h對C-fos、Bax及Bcl-2基因mRNA錶達水平的變化。結果與對照組相比，0．02、0．04 mg/mL柚皮素能引髮CNE2細胞內ROS含量低水平升高，ROS的MFI分彆為5186±183．50、5508±155．37，差異有統計學意義（P＜0．05），由此誘導細胞增殖調控基因C-fos錶達，差異有統計學意義（P＜0．05或P＜0．01），加速細胞週期運轉，促進CNE2細胞分裂增殖；而0．2、0．4 mg/mL柚皮素則能引髮ROS大量產生，ROS的MFI分彆為10758±179．82、11241±114．45，差異有統計學意義（P＜0．01），由此誘導促凋亡基因Bax及抑製抗凋亡基因Bcl-2錶達，促進CNE2細胞凋亡，差異有統計學意義（P＜0．01），有效抑製CNE2細胞增殖。結論在0．005～0．8 mg/mL劑量範圍，柚皮素對CNE2細胞生長具有雙嚮調節作用，相對較低劑量體現為一定的促癌活性，相對較高劑量則體現為彊烈的抑癌活性。
목적：유피소중요적생리활성사기구유엄범적개발응용전경。문중탐토불동제량유피소대인비인암CNE2세포생장적영향급기상관작용궤제。방법 MTT법검측불동제량유피소（0、0．005、0．01、0．02、0．04、0．06、0．08、0．1、0．2、0．4、0．8 mg/mL）작용CNE2세포불동시간（24、48、72 h）대기세포생장솔적영향；류식세포의검측불동제량유피소（0、0．02、0．04 mg/mL ）작용 CNE2세포48 h 대기세포주기적영향；채용 Hochest 33258형광염색관찰불동제량유피소（0、0．2、0．4 mg/mL）작용CNE2세포48 h대기세포조망형태적변화；채용Annexin V-FITC류식세포술검측불동제량유피소（0、0．2、0．4 mg/mL）작용CNE2세포48 h대기세포조망솔적영향；채용2，7-이록을선을산（2，7-dichloro fluorescein diacetate ， DCFH-DA）형광탐침검측불동제량유피소（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）작용CNE2세포48h대기세포내활성양족（reactive oxygen spe-cies， ROS）적변화；채용실시형광정량PCR법（ real-tmie fluorescence quantitative PCR ， qPCR）검측불동제량유피소（0、0．02、0．04、0．2、0．4 mg/mL）작용CNE2세포48 h대C-fos、Bax급Bcl-2기인mRNA표체수평적변화。결과여대조조상비，0．02、0．04 mg/mL유피소능인발CNE2세포내ROS함량저수평승고，ROS적MFI분별위5186±183．50、5508±155．37，차이유통계학의의（P＜0．05），유차유도세포증식조공기인C-fos표체，차이유통계학의의（P＜0．05혹P＜0．01），가속세포주기운전，촉진CNE2세포분렬증식；이0．2、0．4 mg/mL유피소칙능인발ROS대양산생，ROS적MFI분별위10758±179．82、11241±114．45，차이유통계학의의（P＜0．01），유차유도촉조망기인Bax급억제항조망기인Bcl-2표체，촉진CNE2세포조망，차이유통계학의의（P＜0．01），유효억제CNE2세포증식。결론재0．005～0．8 mg/mL제량범위，유피소대CNE2세포생장구유쌍향조절작용，상대교저제량체현위일정적촉암활성，상대교고제량칙체현위강렬적억암활성。
Objective Naringenin has a vast prospect of application because of its important biological activities .This study aims to explore the influence of different concentrations of naringenin on the growth of nasopharyngeal carcinoma CNE 2 cells and its ac-tion mechanisms. Methods Using the MTT method, we measured the effects of naringenin on the growth of CNE 2 cells after treated at the concentrations of 0, 0.005, 0.01, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1, 0.2, 0.4, and 0.8 mg/mL for 24, 48, and 72 hours.At 48 hours, we observed changes in the cycle of the cells treated with naringenin at 0, 0.02 and 0.04 mg/mL by flow cytometry, in the ap-optosis of the cells by Hochest 33258 staining and flow cytometry , in the level of reactive oxygen species ( ROS) in the cells by DCFH-DA staining, and in the mRNA expressions of C-fos, Bax and Bcl-2 by qPCR. Results Compared with the control group , naringe-nin at 0.02 and 0.04 mg/mL induced a low-level rise of ROS in the CNE2 cells (MFI:5186 ±183.50 and 5508 ±155.37, P<0.05), up-regulated the expression of C-fos (P<0.05 or P<0.01), and promoted the proliferation of the cells .However, naringenin at relatively high concentrations of 0.2 and 0.4 mg/mL significantly elevated the level of ROS (MFI:10758 ±179.82 and 11241 ±1 114.45, P<0.01), up-regulated the expression of Bax (P<0.01), down-regulated that of Bcl-2 (P <0.01), induced the apoptosis (P<0.01 ) and suppressed the proliferation of CNE 2 cells. Conclusion Within a concentration range of 0.005-0.8 mg/mL, naringenin may have two-way effects on the growth of CNE2 cells, a carcinogenic effect at a relatively low dose and a good anticancer effect at a relatively high dose .