现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2014年
4期
776-779
,共4页
王金行%周雯雯%程仕彤%刘柏新%满冬亮%杨志东%宋鉴清
王金行%週雯雯%程仕彤%劉柏新%滿鼕亮%楊誌東%宋鑒清
왕금행%주문문%정사동%류백신%만동량%양지동%송감청
miR-21%慢病毒%多发性骨髓瘤
miR-21%慢病毒%多髮性骨髓瘤
miR-21%만병독%다발성골수류
miR-21%slow virus%MM
目的:构建miR-21慢病毒表达载体,感染多发性骨髓瘤(MM)细胞U266,建立稳定表达miR-21的U266细胞系.方法:以has-miR-21前体序列pre-miR-21为模板,设计并合成引物,进行PCR扩增目的基因,并连接到慢病毒表达质粒LV-anti中.对重组质粒进行双酶切鉴定后,所构建载体命名为LV-anti-miR-21-MOI.再进行miR-21基因慢病毒LV-anti-miR-21的包装及病毒滴度测定,将慢病毒颗粒以最适滴度感染MM细胞株U266,通过Aldefluor流式分选出带有目的基因和空载病毒的细胞,用real-timePCR检测感染效率.结果:目的基因与慢病毒载体连接成功.慢病毒LV-anti-miR-21浓缩后的病毒滴度约为1.0×108TU/ml.慢病毒成功感染目标细胞U266,转染效率达90％以上.real-time PCR检测,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量分别为0.69±0.03和0.51 ±0.05较U266/un组(1.08 ±0.05)下降了38.9％和54.9％,差异有显著统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建了miR-21慢病毒表达载体,并建立U266-miR-21稳定转染细胞系.为进一步研究miR-21的功能及作用机制奠定了基础.
目的:構建miR-21慢病毒錶達載體,感染多髮性骨髓瘤(MM)細胞U266,建立穩定錶達miR-21的U266細胞繫.方法:以has-miR-21前體序列pre-miR-21為模闆,設計併閤成引物,進行PCR擴增目的基因,併連接到慢病毒錶達質粒LV-anti中.對重組質粒進行雙酶切鑒定後,所構建載體命名為LV-anti-miR-21-MOI.再進行miR-21基因慢病毒LV-anti-miR-21的包裝及病毒滴度測定,將慢病毒顆粒以最適滴度感染MM細胞株U266,通過Aldefluor流式分選齣帶有目的基因和空載病毒的細胞,用real-timePCR檢測感染效率.結果:目的基因與慢病毒載體連接成功.慢病毒LV-anti-miR-21濃縮後的病毒滴度約為1.0×108TU/ml.慢病毒成功感染目標細胞U266,轉染效率達90％以上.real-time PCR檢測,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20組和MOI 40組miR-21錶達量分彆為0.69±0.03和0.51 ±0.05較U266/un組(1.08 ±0.05)下降瞭38.9％和54.9％,差異有顯著統計學意義(P＜0.05).結論:成功構建瞭miR-21慢病毒錶達載體,併建立U266-miR-21穩定轉染細胞繫.為進一步研究miR-21的功能及作用機製奠定瞭基礎.
목적:구건miR-21만병독표체재체,감염다발성골수류(MM)세포U266,건립은정표체miR-21적U266세포계.방법:이has-miR-21전체서렬pre-miR-21위모판,설계병합성인물,진행PCR확증목적기인,병련접도만병독표체질립LV-anti중.대중조질립진행쌍매절감정후,소구건재체명명위LV-anti-miR-21-MOI.재진행miR-21기인만병독LV-anti-miR-21적포장급병독적도측정,장만병독과립이최괄적도감염MM세포주U266,통과Aldefluor류식분선출대유목적기인화공재병독적세포,용real-timePCR검측감염효솔.결과:목적기인여만병독재체련접성공.만병독LV-anti-miR-21농축후적병독적도약위1.0×108TU/ml.만병독성공감염목표세포U266,전염효솔체90％이상.real-time PCR검측,U266/LV-anti-miR-21만병독MOI 20조화MOI 40조miR-21표체량분별위0.69±0.03화0.51 ±0.05교U266/un조(1.08 ±0.05)하강료38.9％화54.9％,차이유현저통계학의의(P＜0.05).결론:성공구건료miR-21만병독표체재체,병건립U266-miR-21은정전염세포계.위진일보연구miR-21적공능급작용궤제전정료기출.
