上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2014年
2期
5-9
,共5页
张宜辉%张蕊%张军%王洪荣%龚道清
張宜輝%張蕊%張軍%王洪榮%龔道清
장의휘%장예%장군%왕홍영%공도청
鹅%SCD1基因%原代肝细胞%真核表达
鵝%SCD1基因%原代肝細胞%真覈錶達
아%SCD1기인%원대간세포%진핵표체
goose%SCD1 gene%primary hepatocyte%eukaryotic expression
构建硬酯酰辅酶A去饱和酶1 (Stearoyl-CoA Desaturase l,SCD1)真核表达质粒pcDNA3.1(+)/SCD1,转染鹅原代肝细胞验证其对细胞中脂肪代谢的影响.根据鹅SCD1基因设计带有酶切位点引物,RT-PCR扩增SCD1基因,克隆至pMD-19T载体,亚克隆至pcDNA3.1载体,构建重组真核表达载体pCDNA3.1(+)/SCD1.酶切及序列测定测序正确后转染鹅原代培养肝细胞,荧光定量PCR检测SCD1基因的表达,并用油红O染色检测细胞中脂滴情况.结果:成功构建SCD1基因真核表达载体,转染鹅原代培养肝细胞后SCD1基因获得了表达,与脂肪代谢相关基因SREBP表达上调,同时检测到细胞中脂滴明显增多.结论:构建了重组质粒pCDNA3.1(+)/SCD1,并在鹅原代培养细胞中获得表达,为进一步研究SCD1基因在鹅肝脏脂肪代谢中的作用奠定基础.
構建硬酯酰輔酶A去飽和酶1 (Stearoyl-CoA Desaturase l,SCD1)真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)/SCD1,轉染鵝原代肝細胞驗證其對細胞中脂肪代謝的影響.根據鵝SCD1基因設計帶有酶切位點引物,RT-PCR擴增SCD1基因,剋隆至pMD-19T載體,亞剋隆至pcDNA3.1載體,構建重組真覈錶達載體pCDNA3.1(+)/SCD1.酶切及序列測定測序正確後轉染鵝原代培養肝細胞,熒光定量PCR檢測SCD1基因的錶達,併用油紅O染色檢測細胞中脂滴情況.結果:成功構建SCD1基因真覈錶達載體,轉染鵝原代培養肝細胞後SCD1基因穫得瞭錶達,與脂肪代謝相關基因SREBP錶達上調,同時檢測到細胞中脂滴明顯增多.結論:構建瞭重組質粒pCDNA3.1(+)/SCD1,併在鵝原代培養細胞中穫得錶達,為進一步研究SCD1基因在鵝肝髒脂肪代謝中的作用奠定基礎.
구건경지선보매A거포화매1 (Stearoyl-CoA Desaturase l,SCD1)진핵표체질립pcDNA3.1(+)/SCD1,전염아원대간세포험증기대세포중지방대사적영향.근거아SCD1기인설계대유매절위점인물,RT-PCR확증SCD1기인,극륭지pMD-19T재체,아극륭지pcDNA3.1재체,구건중조진핵표체재체pCDNA3.1(+)/SCD1.매절급서렬측정측서정학후전염아원대배양간세포,형광정량PCR검측SCD1기인적표체,병용유홍O염색검측세포중지적정황.결과:성공구건SCD1기인진핵표체재체,전염아원대배양간세포후SCD1기인획득료표체,여지방대사상관기인SREBP표체상조,동시검측도세포중지적명현증다.결론:구건료중조질립pCDNA3.1(+)/SCD1,병재아원대배양세포중획득표체,위진일보연구SCD1기인재아간장지방대사중적작용전정기출.
