山西医科大学学报
山西醫科大學學報
산서의과대학학보
JOURNAL OF SHANXI MEDICAL UNIVERSITY
2014年
4期
255-260
,共6页
马彦%岑雯%刘昕%冯文莉
馬彥%岑雯%劉昕%馮文莉
마언%잠문%류흔%풍문리
烟曲霉%ssk1%融合PCR%基因敲除
煙麯黴%ssk1%融閤PCR%基因敲除
연곡매%ssk1%융합PCR%기인고제
Aspergillus fumigatus%ssk1%fusion PCR%gene knockout
目的 通过两步融合PCR法构建烟曲霉ssk1基因敲除株. 方法 通过在ssk1基因上下游的侧翼序列设计引物时引入15 bp的融合片段的互补的同源区,使用两步融合PCR的方法将长度约为4.3 kb的目的片段融合扩增,并直接使用PCR产物通过传统的原生质体法进行烟曲霉的转化,得到转化子运用PCR和Southern blot进行相应的验证. 结果 通过融合PCR法较快的得到大约4.3 kb的融合的目的基因片段,运用原生质体法成功进行了烟曲霉的转化,得到5个转化子.经过PCR和Southern blot经验证有4株是正确的转化子. 结论 在合适的引物设计及适当的融合PCR反应条件下,两步融合PCR法是一种简单高效的构建烟曲霉基因敲除株的方法,值得推广.
目的 通過兩步融閤PCR法構建煙麯黴ssk1基因敲除株. 方法 通過在ssk1基因上下遊的側翼序列設計引物時引入15 bp的融閤片段的互補的同源區,使用兩步融閤PCR的方法將長度約為4.3 kb的目的片段融閤擴增,併直接使用PCR產物通過傳統的原生質體法進行煙麯黴的轉化,得到轉化子運用PCR和Southern blot進行相應的驗證. 結果 通過融閤PCR法較快的得到大約4.3 kb的融閤的目的基因片段,運用原生質體法成功進行瞭煙麯黴的轉化,得到5箇轉化子.經過PCR和Southern blot經驗證有4株是正確的轉化子. 結論 在閤適的引物設計及適噹的融閤PCR反應條件下,兩步融閤PCR法是一種簡單高效的構建煙麯黴基因敲除株的方法,值得推廣.
목적 통과량보융합PCR법구건연곡매ssk1기인고제주. 방법 통과재ssk1기인상하유적측익서렬설계인물시인입15 bp적융합편단적호보적동원구,사용량보융합PCR적방법장장도약위4.3 kb적목적편단융합확증,병직접사용PCR산물통과전통적원생질체법진행연곡매적전화,득도전화자운용PCR화Southern blot진행상응적험증. 결과 통과융합PCR법교쾌적득도대약4.3 kb적융합적목적기인편단,운용원생질체법성공진행료연곡매적전화,득도5개전화자.경과PCR화Southern blot경험증유4주시정학적전화자. 결론 재합괄적인물설계급괄당적융합PCR반응조건하,량보융합PCR법시일충간단고효적구건연곡매기인고제주적방법,치득추엄.
