安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
11期
3228-3231
,共4页
胆红素氧化酶%Bipolaris australiensis%蛋白纯化%鉴定%酶学性质
膽紅素氧化酶%Bipolaris australiensis%蛋白純化%鑒定%酶學性質
담홍소양화매%Bipolaris australiensis%단백순화%감정%매학성질
Bilirubin oxidase%Bipolaris australiensis%Protein purification%Identification%Enzymatic characteristic
[目的]为了获得B.bipolaris HD-1胆红素氧化酶纯品,确定酶的同源性及其常规酶学性质.[方法]将B.bipolaris HD-1发酵液依次通过硫酸铵盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析确定蛋白的纯度、浓度和酶活力;通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)法获得氨基酸序列,并利用Mascot软件在NCBI蛋白库中的比对,以确定同源蛋白来源;用SDS-PAGE方法测其表观分子量;用等电聚焦方法测定等电点;用Linwerver-Burk双倒数作图法测定米氏常数;并对该酶的酶学性质进行了常规的测定.[结果]获得具有胆红素氧化酶酶活性的电泳纯单体蛋白,酶活为46 000 U/L,比活为1.15 U/mg;MALDI-TOF共获得135个氨基酸,该蛋白与来源于Hel-minthosporium tritici-vulgaris的漆酶前体蛋白序列同源性达100％;蛋白的表观分子量为68 kDa;pI为4.1;它对ABTS和胆红素的米氏常数分别为Km(ABTS) =1.8×10-5 mol/L(pH 3.0)和Km(bilirnbin)=2.7×10-5 mol/L(pH 7.5);对胆红素的最适催化活性为36℃,酶在-40℃下可保持2年,酶活保持在90％以上,在pH 8 ～9.5下可保持相当高的催化胆红素活性,能够耐受高浓度的硝酸钠和尿素,低浓度的叠氮化钠对酶活有促进作用而高浓度则抑制,对氯化钠、溶解氧敏感.[结论]该蛋白具有典型的胆红素氧化酶特性,又存在明显的不同.
[目的]為瞭穫得B.bipolaris HD-1膽紅素氧化酶純品,確定酶的同源性及其常規酶學性質.[方法]將B.bipolaris HD-1髮酵液依次通過硫痠銨鹽析、陰離子交換層析和凝膠過濾層析確定蛋白的純度、濃度和酶活力;通過基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF)法穫得氨基痠序列,併利用Mascot軟件在NCBI蛋白庫中的比對,以確定同源蛋白來源;用SDS-PAGE方法測其錶觀分子量;用等電聚焦方法測定等電點;用Linwerver-Burk雙倒數作圖法測定米氏常數;併對該酶的酶學性質進行瞭常規的測定.[結果]穫得具有膽紅素氧化酶酶活性的電泳純單體蛋白,酶活為46 000 U/L,比活為1.15 U/mg;MALDI-TOF共穫得135箇氨基痠,該蛋白與來源于Hel-minthosporium tritici-vulgaris的漆酶前體蛋白序列同源性達100％;蛋白的錶觀分子量為68 kDa;pI為4.1;它對ABTS和膽紅素的米氏常數分彆為Km(ABTS) =1.8×10-5 mol/L(pH 3.0)和Km(bilirnbin)=2.7×10-5 mol/L(pH 7.5);對膽紅素的最適催化活性為36℃,酶在-40℃下可保持2年,酶活保持在90％以上,在pH 8 ～9.5下可保持相噹高的催化膽紅素活性,能夠耐受高濃度的硝痠鈉和尿素,低濃度的疊氮化鈉對酶活有促進作用而高濃度則抑製,對氯化鈉、溶解氧敏感.[結論]該蛋白具有典型的膽紅素氧化酶特性,又存在明顯的不同.
[목적]위료획득B.bipolaris HD-1담홍소양화매순품,학정매적동원성급기상규매학성질.[방법]장B.bipolaris HD-1발효액의차통과류산안염석、음리자교환층석화응효과려층석학정단백적순도、농도화매활력;통과기질보조격광해석전리비행시간질보(MALDI-TOF)법획득안기산서렬,병이용Mascot연건재NCBI단백고중적비대,이학정동원단백래원;용SDS-PAGE방법측기표관분자량;용등전취초방법측정등전점;용Linwerver-Burk쌍도수작도법측정미씨상수;병대해매적매학성질진행료상규적측정.[결과]획득구유담홍소양화매매활성적전영순단체단백,매활위46 000 U/L,비활위1.15 U/mg;MALDI-TOF공획득135개안기산,해단백여래원우Hel-minthosporium tritici-vulgaris적칠매전체단백서렬동원성체100％;단백적표관분자량위68 kDa;pI위4.1;타대ABTS화담홍소적미씨상수분별위Km(ABTS) =1.8×10-5 mol/L(pH 3.0)화Km(bilirnbin)=2.7×10-5 mol/L(pH 7.5);대담홍소적최괄최화활성위36℃,매재-40℃하가보지2년,매활보지재90％이상,재pH 8 ～9.5하가보지상당고적최화담홍소활성,능구내수고농도적초산납화뇨소,저농도적첩담화납대매활유촉진작용이고농도칙억제,대록화납、용해양민감.[결론]해단백구유전형적담홍소양화매특성,우존재명현적불동.
