安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
11期
3186-3190
,共5页
偏肿革裥菌%锰过氧化物酶%基因克隆%毕赤酵母%基因表达
偏腫革裥菌%錳過氧化物酶%基因剋隆%畢赤酵母%基因錶達
편종혁간균%맹과양화물매%기인극륭%필적효모%기인표체
Lenzites gibbosa%Manganese peroxidase(MnP)%Gene cloning%Pichia pastoris%Gene expression
[目的]研究偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况.[方法]根据白腐菌锰过氧化物酶(MnP)基因保守序列设计引物,采用PCR、RACE及染色体步移等方法,克隆偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因(GenBank登录号JQ327834),进行蛋白序列分析,并通过双酶切的方法获得重组质粒,将该重组质粒电转化至巴斯德毕赤酵母中进行异源表达.[结果]获得偏肿革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全长MnP1基因,命名为Lg-mnp1.蛋白序列分析表明Lg-MnP1含有4个二硫键属于短MnP,预测成熟蛋白分子量为35.94kD,pI为4.43.通过双酶切的方法将Lg-mnp1的开放阅读框(ORF)序列连接到pPICZB载体上,获得重组质粒pPICZB/%-mnp1,转化子经PCR验证后,在BMMY培养基中甲醇诱导培养,在未添加血红素的培养液中MnP胞外酶活在72 h达到最高为7 U/L,表明Lg-mnp1已被转化至毕赤酵母中并可诱导表达.[结论]该方法对偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的克隆及表达情况进行研究,为偏肿革裥菌Lg-mnp1基因的进一步应用提供了依据.
[目的]研究偏腫革裥菌Lg-mnp1基因的剋隆及錶達情況.[方法]根據白腐菌錳過氧化物酶(MnP)基因保守序列設計引物,採用PCR、RACE及染色體步移等方法,剋隆偏腫革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全長MnP1基因(GenBank登錄號JQ327834),進行蛋白序列分析,併通過雙酶切的方法穫得重組質粒,將該重組質粒電轉化至巴斯德畢赤酵母中進行異源錶達.[結果]穫得偏腫革裥菌Lenzites gibbosa CB1的全長MnP1基因,命名為Lg-mnp1.蛋白序列分析錶明Lg-MnP1含有4箇二硫鍵屬于短MnP,預測成熟蛋白分子量為35.94kD,pI為4.43.通過雙酶切的方法將Lg-mnp1的開放閱讀框(ORF)序列連接到pPICZB載體上,穫得重組質粒pPICZB/%-mnp1,轉化子經PCR驗證後,在BMMY培養基中甲醇誘導培養,在未添加血紅素的培養液中MnP胞外酶活在72 h達到最高為7 U/L,錶明Lg-mnp1已被轉化至畢赤酵母中併可誘導錶達.[結論]該方法對偏腫革裥菌Lg-mnp1基因的剋隆及錶達情況進行研究,為偏腫革裥菌Lg-mnp1基因的進一步應用提供瞭依據.
[목적]연구편종혁간균Lg-mnp1기인적극륭급표체정황.[방법]근거백부균맹과양화물매(MnP)기인보수서렬설계인물,채용PCR、RACE급염색체보이등방법,극륭편종혁간균Lenzites gibbosa CB1적전장MnP1기인(GenBank등록호JQ327834),진행단백서렬분석,병통과쌍매절적방법획득중조질립,장해중조질립전전화지파사덕필적효모중진행이원표체.[결과]획득편종혁간균Lenzites gibbosa CB1적전장MnP1기인,명명위Lg-mnp1.단백서렬분석표명Lg-MnP1함유4개이류건속우단MnP,예측성숙단백분자량위35.94kD,pI위4.43.통과쌍매절적방법장Lg-mnp1적개방열독광(ORF)서렬련접도pPICZB재체상,획득중조질립pPICZB/%-mnp1,전화자경PCR험증후,재BMMY배양기중갑순유도배양,재미첨가혈홍소적배양액중MnP포외매활재72 h체도최고위7 U/L,표명Lg-mnp1이피전화지필적효모중병가유도표체.[결론]해방법대편종혁간균Lg-mnp1기인적극륭급표체정황진행연구,위편종혁간균Lg-mnp1기인적진일보응용제공료의거.
