广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2014年
8期
1149-1153
,共5页
肝肿瘤%人着色性干皮病D组基因%转染%P53基因%原癌基因蛋白质Ets-1
肝腫瘤%人著色性榦皮病D組基因%轉染%P53基因%原癌基因蛋白質Ets-1
간종류%인착색성간피병D조기인%전염%P53기인%원암기인단백질Ets-1
liver neoplasms%xeroderma pigmentosum group D gene%transfection%P53 gene%proto-oncogene protein Ets-1
目的：探讨人剪切修复基因XPD对肝癌细胞P53和Ets-1基因的影响。方法使用脂质体瞬时转染技术，将pEGFP-N2-XPD重组质粒转染至肝癌细胞HepG2，24 h后加入20μmol/L的P53抑制剂Pifithrin-α，孵育24 h，并以未经转染的HepG2细胞作为空白对照。 RT-PCR、Western blot 检测细胞中XPD、P53、phospho -P53（ser-15）、Ets-1的mRNA和蛋白的表达变化，MTT法观察细胞增殖的活力，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果与空白对照比较，转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后，HepG2细胞XPD、P53 mRNA和蛋白表达上调（ P＜0.01），而Ets-1 mRNA和蛋白表达下调（P＜0.01），加入Pifithrin-α后，XPD、P53 mRNA和蛋白表达下调，Ets-1 mRNA和蛋白表达上调（ P＜0.01）。转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后，HepG2细胞进入S期发生阻滞，停滞在G1期（P＜0.01），加入Pifithrin-α后，HepG2细胞G1期细胞减少，S期细胞增多（P＜0.01）。转染pEGFP-N2-XPD重组质粒后，HepG2细胞增殖活力下降（ P＜0.01），加入Pifithrin-α后， HepG2细胞增殖活力上升（ P＜0.01）。结论野生型XPD基因在转染至肝癌HepG2细胞后，可以上调P53的表达，通过P53途径抑制Ets-1的表达，促使肝癌细胞凋亡。
目的：探討人剪切脩複基因XPD對肝癌細胞P53和Ets-1基因的影響。方法使用脂質體瞬時轉染技術，將pEGFP-N2-XPD重組質粒轉染至肝癌細胞HepG2，24 h後加入20μmol/L的P53抑製劑Pifithrin-α，孵育24 h，併以未經轉染的HepG2細胞作為空白對照。 RT-PCR、Western blot 檢測細胞中XPD、P53、phospho -P53（ser-15）、Ets-1的mRNA和蛋白的錶達變化，MTT法觀察細胞增殖的活力，流式細胞儀檢測細胞週期變化。結果與空白對照比較，轉染pEGFP-N2-XPD重組質粒後，HepG2細胞XPD、P53 mRNA和蛋白錶達上調（ P＜0.01），而Ets-1 mRNA和蛋白錶達下調（P＜0.01），加入Pifithrin-α後，XPD、P53 mRNA和蛋白錶達下調，Ets-1 mRNA和蛋白錶達上調（ P＜0.01）。轉染pEGFP-N2-XPD重組質粒後，HepG2細胞進入S期髮生阻滯，停滯在G1期（P＜0.01），加入Pifithrin-α後，HepG2細胞G1期細胞減少，S期細胞增多（P＜0.01）。轉染pEGFP-N2-XPD重組質粒後，HepG2細胞增殖活力下降（ P＜0.01），加入Pifithrin-α後， HepG2細胞增殖活力上升（ P＜0.01）。結論野生型XPD基因在轉染至肝癌HepG2細胞後，可以上調P53的錶達，通過P53途徑抑製Ets-1的錶達，促使肝癌細胞凋亡。
목적：탐토인전절수복기인XPD대간암세포P53화Ets-1기인적영향。방법사용지질체순시전염기술，장pEGFP-N2-XPD중조질립전염지간암세포HepG2，24 h후가입20μmol/L적P53억제제Pifithrin-α，부육24 h，병이미경전염적HepG2세포작위공백대조。 RT-PCR、Western blot 검측세포중XPD、P53、phospho -P53（ser-15）、Ets-1적mRNA화단백적표체변화，MTT법관찰세포증식적활력，류식세포의검측세포주기변화。결과여공백대조비교，전염pEGFP-N2-XPD중조질립후，HepG2세포XPD、P53 mRNA화단백표체상조（ P＜0.01），이Ets-1 mRNA화단백표체하조（P＜0.01），가입Pifithrin-α후，XPD、P53 mRNA화단백표체하조，Ets-1 mRNA화단백표체상조（ P＜0.01）。전염pEGFP-N2-XPD중조질립후，HepG2세포진입S기발생조체，정체재G1기（P＜0.01），가입Pifithrin-α후，HepG2세포G1기세포감소，S기세포증다（P＜0.01）。전염pEGFP-N2-XPD중조질립후，HepG2세포증식활력하강（ P＜0.01），가입Pifithrin-α후， HepG2세포증식활력상승（ P＜0.01）。결론야생형XPD기인재전염지간암HepG2세포후，가이상조P53적표체，통과P53도경억제Ets-1적표체，촉사간암세포조망。
Objective To investigate the effects of xeroderma pigmentosum D ( XPD) on the growth of hepatoma cells and the expressions of P53 and Ets-1.Methods Human hepatoma cells (HepG2) were transfected with the plas-mids of pEGFP-N2-XPD using Lipofectamine 2000, and subsequently incubated with 20μmol/L Pifithrin-α( P53 in-hibitor) for 24 h.Blank control group (no transfecting and adding medicine ) was set.The expressions of XPD, P53, phospho-P53 (ser-15) and Ets-1 were assessed by RT-PCR and Western blot.Flow cytometry was used to examine the cell cycle and apoptosis .MTT assay was used to detect the cell proliferation .Results After transfected with the pEG-FP-N2-XPD plasmid, the mRNA and protein expression of XPD and P53 were significantly up -regulated, while the expression of Ets-1 was significantly down -regulated (P<0.01).Moreover, the cell proliferation was inhibited and the apoptosis was accelerated with pEGFP -N2-XPD plasmid transfected , which was reversed by Pifithrin -α.Conclusion Wild-XPD gene can restrain the proliferation, down -regulate Ets -1 via P53 pathway, and impel the apoptosis ofhepatoma cells.
