CAJ | 학술논문

为建立感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳(2-DE)方法.本研究通过对人工感染NDRV的雏番鸭肝脏病变的观察,对肝脏蛋白质提取裂解液的配方、样品上样量、一向等电聚焦(IEF)参数等条件的对比和优化,建立了有效的番鸭肝脏2-DE方法.结果表明:采用攻毒后病变最典型的第5天的番鸭肝脏作为研究样品;采用研磨-超声-裂解液(7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4％CHAPS、65mmol/L DTT、40mmol/L Tris-base、0.5％ IPG buffer)法提取肝脏蛋白质,结合2D clean-up kit以及去拖尾DeStreak试剂纯化蛋白,按1100μg上样,设置IEF参数为:50V12h、200V 1.5h、500V 1h、1000V 1h、8000V 3h、8000V 60000Vh、500V维持,采用胶体考马斯亮蓝染色,能获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱.应用建立的2-DE方法和PDQest 8.0分析软件,发现26个与正常番鸭肝脏蛋白表达水平超过3倍的差异蛋白点.该方法的建立为进一步寻找NDRV感染宿主组织相关蛋白以及水禽呼肠孤病毒差异蛋白质组学研究提供了技术支持.
위건립감염신형압호장고병독(NDRV)적번압간장단백질조쌍향전영(2-DE)방법.본연구통과대인공감염NDRV적추번압간장병변적관찰,대간장단백질제취렬해액적배방、양품상양량、일향등전취초(IEF)삼수등조건적대비화우화,건립료유효적번압간장2-DE방법.결과표명:채용공독후병변최전형적제5천적번압간장작위연구양품;채용연마-초성-렬해액(7mol/L뇨소、2mol/L류뇨、4％CHAPS、65mmol/L DTT、40mmol/L Tris-base、0.5％ IPG buffer)법제취간장단백질,결합2D clean-up kit이급거타미DeStreak시제순화단백,안1100μg상양,설치IEF삼수위:50V12h、200V 1.5h、500V 1h、1000V 1h、8000V 3h、8000V 60000Vh、500V유지,채용효체고마사량람염색,능획득분변솔고、중복성호적2-DE도보.응용건립적2-DE방법화PDQest 8.0분석연건,발현26개여정상번압간장단백표체수평초과3배적차이단백점.해방법적건립위진일보심조NDRV감염숙주조직상관단백이급수금호장고병독차이단백질조학연구제공료기술지지.