生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
2期
248-251
,共4页
郭紫芬%轩贵平%陈方方%张式一
郭紫芬%軒貴平%陳方方%張式一
곽자분%헌귀평%진방방%장식일
重叠延伸PCR%多位点突变%定点突变%冷冻析出
重疊延伸PCR%多位點突變%定點突變%冷凍析齣
중첩연신PCR%다위점돌변%정점돌변%냉동석출
overlap extension PCR%multisite mutation%site-directed mutagenesis%frozen precipitation
目的:改进传统重叠延伸PCR方法,实现引入3个不同DNA突变位点的简便的多位点定点突变.方法:根据前期构建的包含人线粒体12S rRNA(NC 01290)3个热点突变位点的野生型质粒序列,利用Muta Primer 2.0软件设计针对3个热点突变位点的3对互补的定点突变引物,以野生型质粒为模板,结合重叠延伸PCR反应和冷冻析出法,产生同时包含3个突变位点的突变目的片段,酶切后克隆到载体中,测序确证是否突变成功.结果:DNA测序证实3个不同突变位点同时成功引入,定点突变载体构建成功.结论:用改进的重叠延伸PCR技术能简便、高效地获得多位点定点突变载体,在分子生物学领域有较高的使用价值.
目的:改進傳統重疊延伸PCR方法,實現引入3箇不同DNA突變位點的簡便的多位點定點突變.方法:根據前期構建的包含人線粒體12S rRNA(NC 01290)3箇熱點突變位點的野生型質粒序列,利用Muta Primer 2.0軟件設計針對3箇熱點突變位點的3對互補的定點突變引物,以野生型質粒為模闆,結閤重疊延伸PCR反應和冷凍析齣法,產生同時包含3箇突變位點的突變目的片段,酶切後剋隆到載體中,測序確證是否突變成功.結果:DNA測序證實3箇不同突變位點同時成功引入,定點突變載體構建成功.結論:用改進的重疊延伸PCR技術能簡便、高效地穫得多位點定點突變載體,在分子生物學領域有較高的使用價值.
목적:개진전통중첩연신PCR방법,실현인입3개불동DNA돌변위점적간편적다위점정점돌변.방법:근거전기구건적포함인선립체12S rRNA(NC 01290)3개열점돌변위점적야생형질립서렬,이용Muta Primer 2.0연건설계침대3개열점돌변위점적3대호보적정점돌변인물,이야생형질립위모판,결합중첩연신PCR반응화냉동석출법,산생동시포함3개돌변위점적돌변목적편단,매절후극륭도재체중,측서학증시부돌변성공.결과:DNA측서증실3개불동돌변위점동시성공인입,정점돌변재체구건성공.결론:용개진적중첩연신PCR기술능간편、고효지획득다위점정점돌변재체,재분자생물학영역유교고적사용개치.
