生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
2期
194-197
,共4页
李琳%郭彦%赵光宇%于虹%孙世惠%潘婷%唐健%周育森%樊卫平
李琳%郭彥%趙光宇%于虹%孫世惠%潘婷%唐健%週育森%樊衛平
리림%곽언%조광우%우홍%손세혜%반정%당건%주육삼%번위평
中东呼吸综合征冠状病毒%S蛋白%假病毒%中和试验
中東呼吸綜閤徵冠狀病毒%S蛋白%假病毒%中和試驗
중동호흡종합정관상병독%S단백%가병독%중화시험
Middle East respiratory syndrome coronavirus%S protein%pseudovirus%neutralization
目的:为了避免中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染与中和试验中操作活病毒带来的生物安全隐患,构建只具有一次感染能力而无复制能力的MERS假病毒,建立MERS假病毒系统,并应用于中和抗体检测.方法:构建含有MERS-CoV S基因的重组质粒pcDNA3.1-MERS-S,与缺失Env基因、含有萤光素酶报告基因的HIV-1骨架质粒pNL4-3.Luc.RE共转染293T细胞,收获含有假病毒的上清;通过Western印迹、细胞感染实验和血清中和试验,确定是否包装出MERS假病毒,及是否能有效应用于细胞感染与中和试验.结果:MERS假病毒pMERS-S培养上清经Western印迹鉴定出相对分子质量为25×103的HIV-1 P24蛋白和相对分子质量为180×103的MERS-CoV S蛋白;与阴性对照假病毒pEnv-相比,pMERS-S能有效感染MERS-CoV敏感细胞系Huh-7,在感染细胞中产生荧光信号,感染细胞的假病毒量与产生的荧光信号呈明显的量效关系;在MERS假病毒中和试验中,pMERS-S能被MERS-CoV中和抗体中和而失去感染力,反映抗体对MERS-CoV的中和活性.结论:建立了不依赖于BSL-3高等级生物安全条件的MERS假病毒系统,并有效应用于中和抗体检测,为MERS-CoV疫苗、药物评价及病毒致病机制研究提供了良好的技术支撑手段.
目的:為瞭避免中東呼吸綜閤徵冠狀病毒(MERS-CoV)感染與中和試驗中操作活病毒帶來的生物安全隱患,構建隻具有一次感染能力而無複製能力的MERS假病毒,建立MERS假病毒繫統,併應用于中和抗體檢測.方法:構建含有MERS-CoV S基因的重組質粒pcDNA3.1-MERS-S,與缺失Env基因、含有螢光素酶報告基因的HIV-1骨架質粒pNL4-3.Luc.RE共轉染293T細胞,收穫含有假病毒的上清;通過Western印跡、細胞感染實驗和血清中和試驗,確定是否包裝齣MERS假病毒,及是否能有效應用于細胞感染與中和試驗.結果:MERS假病毒pMERS-S培養上清經Western印跡鑒定齣相對分子質量為25×103的HIV-1 P24蛋白和相對分子質量為180×103的MERS-CoV S蛋白;與陰性對照假病毒pEnv-相比,pMERS-S能有效感染MERS-CoV敏感細胞繫Huh-7,在感染細胞中產生熒光信號,感染細胞的假病毒量與產生的熒光信號呈明顯的量效關繫;在MERS假病毒中和試驗中,pMERS-S能被MERS-CoV中和抗體中和而失去感染力,反映抗體對MERS-CoV的中和活性.結論:建立瞭不依賴于BSL-3高等級生物安全條件的MERS假病毒繫統,併有效應用于中和抗體檢測,為MERS-CoV疫苗、藥物評價及病毒緻病機製研究提供瞭良好的技術支撐手段.
목적:위료피면중동호흡종합정관상병독(MERS-CoV)감염여중화시험중조작활병독대래적생물안전은환,구건지구유일차감염능력이무복제능력적MERS가병독,건립MERS가병독계통,병응용우중화항체검측.방법:구건함유MERS-CoV S기인적중조질립pcDNA3.1-MERS-S,여결실Env기인、함유형광소매보고기인적HIV-1골가질립pNL4-3.Luc.RE공전염293T세포,수획함유가병독적상청;통과Western인적、세포감염실험화혈청중화시험,학정시부포장출MERS가병독,급시부능유효응용우세포감염여중화시험.결과:MERS가병독pMERS-S배양상청경Western인적감정출상대분자질량위25×103적HIV-1 P24단백화상대분자질량위180×103적MERS-CoV S단백;여음성대조가병독pEnv-상비,pMERS-S능유효감염MERS-CoV민감세포계Huh-7,재감염세포중산생형광신호,감염세포적가병독량여산생적형광신호정명현적량효관계;재MERS가병독중화시험중,pMERS-S능피MERS-CoV중화항체중화이실거감염력,반영항체대MERS-CoV적중화활성.결론:건립료불의뢰우BSL-3고등급생물안전조건적MERS가병독계통,병유효응용우중화항체검측,위MERS-CoV역묘、약물평개급병독치병궤제연구제공료량호적기술지탱수단.
