生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
2期
183-188
,共6页
秦性良%苏雪婷%丁红梅%黄皑雪%李慧%侯绿滨%葛兴枫%李洁%邵宁生
秦性良%囌雪婷%丁紅梅%黃皚雪%李慧%侯綠濱%葛興楓%李潔%邵寧生
진성량%소설정%정홍매%황애설%리혜%후록빈%갈흥풍%리길%소저생
p53%p53保守结合位点%转录调控%microRNA
p53%p53保守結閤位點%轉錄調控%microRNA
p53%p53보수결합위점%전록조공%microRNA
p53%p53 consensus sequence%transcription regulation%microRNA
目的:构建含p53保守结合位点的microRNA(miRNA)表达载体,促进相关miRNA在具有野生型p53蛋白细胞中的高效表达.方法:改构miRNA表达载体pCMV-miR,在其多克隆位点前插入p53保守结合位点,分别将miR-138、miR-34a和miR-21前体序列pre-miR-138、pre-miR-34a和pre-miR-21插入上述改构的载体pCMV/p53-miR,将构建的pCMV/p53-miR-138、pCMV/p53-miR-34a和pCMV/p53-miR-21表达载体转染具有野生型p53的HeLa细胞和不表达p53的H1299细胞,分析p53对上述miRNA表达调控的影响.结果:转染改构的miRNA表达载体后,HeLa细胞中miR-138、miR-34a和miR-21的表达水平明显提高,它们对应的已知靶基因Cyclin D3、CDK2和PTEN的表达同时被显著下调.结论:在p53转录调控作用下,具有p53保守结合位点的miRNA表达载体能够更加有效地提高miRNA的表达水平;构建的载体不但可用于促进相关miRNA的表达,也能用于miRNA是否受p53调控的检测.
目的:構建含p53保守結閤位點的microRNA(miRNA)錶達載體,促進相關miRNA在具有野生型p53蛋白細胞中的高效錶達.方法:改構miRNA錶達載體pCMV-miR,在其多剋隆位點前插入p53保守結閤位點,分彆將miR-138、miR-34a和miR-21前體序列pre-miR-138、pre-miR-34a和pre-miR-21插入上述改構的載體pCMV/p53-miR,將構建的pCMV/p53-miR-138、pCMV/p53-miR-34a和pCMV/p53-miR-21錶達載體轉染具有野生型p53的HeLa細胞和不錶達p53的H1299細胞,分析p53對上述miRNA錶達調控的影響.結果:轉染改構的miRNA錶達載體後,HeLa細胞中miR-138、miR-34a和miR-21的錶達水平明顯提高,它們對應的已知靶基因Cyclin D3、CDK2和PTEN的錶達同時被顯著下調.結論:在p53轉錄調控作用下,具有p53保守結閤位點的miRNA錶達載體能夠更加有效地提高miRNA的錶達水平;構建的載體不但可用于促進相關miRNA的錶達,也能用于miRNA是否受p53調控的檢測.
목적:구건함p53보수결합위점적microRNA(miRNA)표체재체,촉진상관miRNA재구유야생형p53단백세포중적고효표체.방법:개구miRNA표체재체pCMV-miR,재기다극륭위점전삽입p53보수결합위점,분별장miR-138、miR-34a화miR-21전체서렬pre-miR-138、pre-miR-34a화pre-miR-21삽입상술개구적재체pCMV/p53-miR,장구건적pCMV/p53-miR-138、pCMV/p53-miR-34a화pCMV/p53-miR-21표체재체전염구유야생형p53적HeLa세포화불표체p53적H1299세포,분석p53대상술miRNA표체조공적영향.결과:전염개구적miRNA표체재체후,HeLa세포중miR-138、miR-34a화miR-21적표체수평명현제고,타문대응적이지파기인Cyclin D3、CDK2화PTEN적표체동시피현저하조.결론:재p53전록조공작용하,구유p53보수결합위점적miRNA표체재체능구경가유효지제고miRNA적표체수평;구건적재체불단가용우촉진상관miRNA적표체,야능용우miRNA시부수p53조공적검측.
