汉坦病毒S基因的克隆及体外转录
한탄병독S기인적극륭급체외전록
Cloning and RNA Transcription in Vitro of S Gene of Hantavirus
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
    2014年 2期 179-182 ,共4页

    郝丽娜%胡丹%吕恒%张锦海%张凤玉%龚秀芳%李丙军%朱进%潘秀珍

    학려나%호단%려항%장금해%장봉옥%공수방%리병군%주진%반수진

    汉坦病毒%克隆%体外转录 漢坦病毒%剋隆%體外轉錄
    한탄병독%극륭%체외전록
    hantavirus%S gene%cloning%transcription in vitro
    目的:通过基因克隆和体外转录,获得汉坦病毒汉滩型76118株及汉城型R22株S基因的RNA全长cRNA,为汉坦病毒病原学检测提供阳性定量标准品.方法:设计汉滩型76118株和汉城型R22株S基因克隆引物,PCR获得相应片段,分别克隆至含双启动子的PCRⅡ载体中,测序鉴定无误后,重组质粒分别经内切酶Spe Ⅰ、Sac Ⅰ线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,产物经DNase处理、纯化后测定浓度,经RT-PCR验证.结果:获得汉滩型76118株及汉城型R22株S基因的cRNA片段,并可准确定量其拷贝数,76118株和R22株的质量浓度分别为80、17.58 ng/μL.结论:获得的cRNA样品可作为汉坦病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品.
    목적:통과기인극륭화체외전록,획득한탄병독한탄형76118주급한성형R22주S기인적RNA전장cRNA,위한탄병독병원학검측제공양성정량표준품.방법:설계한탄형76118주화한성형R22주S기인극륭인물,PCR획득상응편단,분별극륭지함쌍계동자적PCRⅡ재체중,측서감정무오후,중조질립분별경내절매Spe Ⅰ、Sac Ⅰ선성화,용T7RNA취합매진행체외전록,산물경DNase처리、순화후측정농도,경RT-PCR험증.결과:획득한탄형76118주급한성형R22주S기인적cRNA편단,병가준학정량기고패수,76118주화R22주적질량농도분별위80、17.58 ng/μL.결론:획득적cRNA양품가작위한탄병독핵산쾌속검측방법적양성정량표준품.
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