生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2014年
2期
170-174
,共5页
钟菲菲%杨慧兰%樊建勇%刘岩%高睿迪%游韶平
鐘菲菲%楊慧蘭%樊建勇%劉巖%高睿迪%遊韶平
종비비%양혜란%번건용%류암%고예적%유소평
2型单纯疱疹病毒%感染细胞多肽34.5%非洲绿猴肾细胞%真核表达
2型單純皰疹病毒%感染細胞多肽34.5%非洲綠猴腎細胞%真覈錶達
2형단순포진병독%감염세포다태34.5%비주록후신세포%진핵표체
herpes simplex virus type 2%infected cell protein 34.5%Vero cells%eukaryotic expression
目的:在非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)中表达2型单纯疱疹病毒(HSV-2)毒力蛋白感染细胞多肽34.5(ICP34.5),并检测其对Vero细胞活性的影响.方法:PCR扩增HSV-2的ICP34.5基因,连接至pEGFP-C2载体,并对重组真核表达载体pEGFP-ICP34.5进行双酶切测序验证;将重组子瞬时转染Vero细胞,RT-PCR检测其在mRNA水平的表达,荧光倒置显微镜观察融合蛋白的表达,MTT法检测细胞活性.结果:经双酶切和测序验证表明pEGFP-ICP34.5构建成功,转染细胞后经RT-PCR验证有目的基因的转录,荧光显微镜下观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达,MTT法检测结果证实重组质粒可以抵消空质粒对细胞的损伤作用.结论:构建了pEGFP-ICP34.5真核表达载体,其能在Vero细胞中高效表达,并能抵消空质粒对细胞的损伤作用.
目的:在非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)中錶達2型單純皰疹病毒(HSV-2)毒力蛋白感染細胞多肽34.5(ICP34.5),併檢測其對Vero細胞活性的影響.方法:PCR擴增HSV-2的ICP34.5基因,連接至pEGFP-C2載體,併對重組真覈錶達載體pEGFP-ICP34.5進行雙酶切測序驗證;將重組子瞬時轉染Vero細胞,RT-PCR檢測其在mRNA水平的錶達,熒光倒置顯微鏡觀察融閤蛋白的錶達,MTT法檢測細胞活性.結果:經雙酶切和測序驗證錶明pEGFP-ICP34.5構建成功,轉染細胞後經RT-PCR驗證有目的基因的轉錄,熒光顯微鏡下觀察到融閤蛋白在轉染的Vero細胞中錶達,MTT法檢測結果證實重組質粒可以牴消空質粒對細胞的損傷作用.結論:構建瞭pEGFP-ICP34.5真覈錶達載體,其能在Vero細胞中高效錶達,併能牴消空質粒對細胞的損傷作用.
목적:재비주록후신세포(Vero세포)중표체2형단순포진병독(HSV-2)독력단백감염세포다태34.5(ICP34.5),병검측기대Vero세포활성적영향.방법:PCR확증HSV-2적ICP34.5기인,련접지pEGFP-C2재체,병대중조진핵표체재체pEGFP-ICP34.5진행쌍매절측서험증;장중조자순시전염Vero세포,RT-PCR검측기재mRNA수평적표체,형광도치현미경관찰융합단백적표체,MTT법검측세포활성.결과:경쌍매절화측서험증표명pEGFP-ICP34.5구건성공,전염세포후경RT-PCR험증유목적기인적전록,형광현미경하관찰도융합단백재전염적Vero세포중표체,MTT법검측결과증실중조질립가이저소공질립대세포적손상작용.결론:구건료pEGFP-ICP34.5진핵표체재체,기능재Vero세포중고효표체,병능저소공질립대세포적손상작용.
