CAJ | 학술논문

目的通过在体灌注Triton X-100、SDS溶液法制备大鼠全肾去细胞生物支架,并对支架制备过程中的关键步骤进行程序性检测、分析,为制备科学合理的实验用大鼠全肾去细胞生物支架提供基础.方法 SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只.肝素化后直接切取肾脏作为对照组(control组);肝素PBS灌注组(H组);肝素PBS、Triton X-100灌注组(HT组);肝素PBS、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)溶液灌注组(HTS组).HE、Masson、PAS染色及透射电镜观察各组肾组织病理及超微结构改变,免疫荧光结合4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)观察各组胶原蛋白Ⅳ(collagenⅣ)、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)、硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)、弹性蛋白(elastin)及细胞核的表达情况,总DNA测定各组DNA残留浓度.结果 Triton X-100、SDS灌注6h左右制备大鼠肾脏去细胞生物支架.在灌注过程中,肾内细胞和细胞碎片逐渐被清洗,最终变成半透明状.HE、Masson、PAS染色及透射电镜显示连续分布、形态排列类似肾小球、肾小管轮廓结构的网状结构,基膜连续完整.免疫荧光结合DAPI染色结果表明,去细胞过程中细胞外基质中的重要蛋白collagen IV、LN、FN、HSPG2、elastin都较好的得到了保存,细胞核在灌注过程中逐渐减少,直至完全消失;最终残留组织的DNA为4.90μg/g.结论通过合适浓度和灌注比例的Triton X-100、SDS制备大鼠肾脏去细胞生物支架,并对其进行程序性分析,发现能有效清除大鼠肾内所有细胞成分,较完整的保留网络状肾及肾血管细胞外基质结构和成分,是一种简单易行且较为理想的制备实验用全肾生物支架的方法.
목적 통과재체관주Triton X-100、SDS용액법제비대서전신거세포생물지가,병대지가제비과정중적관건보취진행정서성검측、분석,위제비과학합리적실험용대서전신거세포생물지가제공기출.방법 SD대서40지,수궤분위4조,매조10지.간소화후직접절취신장작위대조조(control조);간소PBS관주조(H조);간소PBS、Triton X-100관주조(HT조);간소PBS、Triton X-100、십이완기류산납(SDS)용액관주조(HTS조).HE、Masson、PAS염색급투사전경관찰각조신조직병리급초미결구개변,면역형광결합4,6-이미기-2-분기신타(DAPI)관찰각조효원단백Ⅳ(collagenⅣ)、층점련단백(LN)、섬유련접단백(FN)、류산을선간소단백다당2(HSPG2)、탄성단백(elastin)급세포핵적표체정황,총DNA측정각조DNA잔류농도.결과 Triton X-100、SDS관주6h좌우제비대서신장거세포생물지가.재관주과정중,신내세포화세포쇄편축점피청세,최종변성반투명상.HE、Masson、PAS염색급투사전경현시련속분포、형태배렬유사신소구、신소관륜곽결구적망상결구,기막련속완정.면역형광결합DAPI염색결과표명,거세포과정중세포외기질중적중요단백collagen IV、LN、FN、HSPG2、elastin도교호적득도료보존,세포핵재관주과정중축점감소,직지완전소실;최종잔류조직적DNA위4.90μg/g.결론 통과합괄농도화관주비례적Triton X-100、SDS제비대서신장거세포생물지가,병대기진행정서성분석,발현능유효청제대서신내소유세포성분,교완정적보류망락상신급신혈관세포외기질결구화성분,시일충간단역행차교위이상적제비실험용전신생물지가적방법.