安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
12期
3497-3498,3501
,共3页
华宇峰%刘京%王春台%刘学群%谭艳平
華宇峰%劉京%王春檯%劉學群%譚豔平
화우봉%류경%왕춘태%류학군%담염평
水稻%红莲型细胞质雄性不育%体外转录%Northern Blot
水稻%紅蓮型細胞質雄性不育%體外轉錄%Northern Blot
수도%홍련형세포질웅성불육%체외전록%Northern Blot
Rice%Honglian Cytoplasmic Male Sterile%In vitro transcription%Northern blot
[目的]通过基因克隆和体外转录技术获得水稻红莲型细胞质雄性不育(HL-CMS)不育系粤泰A(YTA)中的2个细胞质雄性不育基因orf216和orf79的RNA,为Northem Blot检测提供阳性定量标准品,并可作为凝胶阻滞试验的底物,用于研究与恢复基因编码产物的相互作用,从而为阐释不育基因与恢复基因的相互作用分子机制奠定基础.[方法]以红莲型胞质雄性不育基因orf216和orfH79的特异引物,利用不育乐YTA为材料,PCR扩增获得相应片段,分别连接至pGEM-T Easy质粒并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,补平粘性末端,以rN4为底物、用依赖于DNA的RNA聚合酶进行体外转录,转录产物用DNase处理除去DNA模板,纯化并测定RNA浓度,并用Northem Blot验证.[结果]获得了细胞质雄性不育基因orf216和orfH79各自的RNA,经检测orf216浓度为1.286ug/ul,A260/A280为2.01;orfH79浓度为1.006μ/ul,A260/A280为2.10.[结论]运用体外转录技术获得的RNA片段条带单一,纯度较高,可用于体外大量获取目的RNA.
[目的]通過基因剋隆和體外轉錄技術穫得水稻紅蓮型細胞質雄性不育(HL-CMS)不育繫粵泰A(YTA)中的2箇細胞質雄性不育基因orf216和orf79的RNA,為Northem Blot檢測提供暘性定量標準品,併可作為凝膠阻滯試驗的底物,用于研究與恢複基因編碼產物的相互作用,從而為闡釋不育基因與恢複基因的相互作用分子機製奠定基礎.[方法]以紅蓮型胞質雄性不育基因orf216和orfH79的特異引物,利用不育樂YTA為材料,PCR擴增穫得相應片段,分彆連接至pGEM-T Easy質粒併篩選暘性重組質粒,測序鑒定後酶切線性化,補平粘性末耑,以rN4為底物、用依賴于DNA的RNA聚閤酶進行體外轉錄,轉錄產物用DNase處理除去DNA模闆,純化併測定RNA濃度,併用Northem Blot驗證.[結果]穫得瞭細胞質雄性不育基因orf216和orfH79各自的RNA,經檢測orf216濃度為1.286ug/ul,A260/A280為2.01;orfH79濃度為1.006μ/ul,A260/A280為2.10.[結論]運用體外轉錄技術穫得的RNA片段條帶單一,純度較高,可用于體外大量穫取目的RNA.
[목적]통과기인극륭화체외전록기술획득수도홍련형세포질웅성불육(HL-CMS)불육계월태A(YTA)중적2개세포질웅성불육기인orf216화orf79적RNA,위Northem Blot검측제공양성정량표준품,병가작위응효조체시험적저물,용우연구여회복기인편마산물적상호작용,종이위천석불육기인여회복기인적상호작용분자궤제전정기출.[방법]이홍련형포질웅성불육기인orf216화orfH79적특이인물,이용불육악YTA위재료,PCR확증획득상응편단,분별련접지pGEM-T Easy질립병사선양성중조질립,측서감정후매절선성화,보평점성말단,이rN4위저물、용의뢰우DNA적RNA취합매진행체외전록,전록산물용DNase처리제거DNA모판,순화병측정RNA농도,병용Northem Blot험증.[결과]획득료세포질웅성불육기인orf216화orfH79각자적RNA,경검측orf216농도위1.286ug/ul,A260/A280위2.01;orfH79농도위1.006μ/ul,A260/A280위2.10.[결론]운용체외전록기술획득적RNA편단조대단일,순도교고,가용우체외대량획취목적RNA.
