CAJ | 학술논문

[目的]优化玉米和拟南芥原生质体的制备条件及瞬时表达体系.[方法]以不同时期玉米叶片和拟南芥为材料分离原生质体,通过对不同酶浓度,解离时间和渗透压的研究,优化最佳分离原生质体体系;原生质体再经PEG介导的转化,通过GFP基因表达百分比鉴定原生质体活性和转化效率.[结果]玉米和拟南芥原生质分离的最佳条件为:纤维素酶1.5％,离析酶0.5％;拟南芥酶解4h,甘露醇浓度0.4 mol/L;玉米酶解6h,甘露醇浓度0.45 ～0.50 mol/L.最佳生长时期为:拟南芥6～8片叶;玉米二片叶.用去内毒素质粒经PEG(玉米30％ PEG,拟南芥40％ PEG)诱导转化置于黑暗下培养,原生质体活性和转化效率较高,原生质体中可以观察到明显的GFP荧光.[结论]玉米和拟南芥原生质体的制备受酶浓度,解离时间和渗透压的影响,在原生质体转化过程中,质粒DNA纯度,PEG浓度等是影响转化效率的关键因素,与拟南芥原生质体相比玉米原生质体要稳定性差一些.
[목적]우화옥미화의남개원생질체적제비조건급순시표체체계.[방법]이불동시기옥미협편화의남개위재료분리원생질체,통과대불동매농도,해리시간화삼투압적연구,우화최가분리원생질체체계;원생질체재경PEG개도적전화,통과GFP기인표체백분비감정원생질체활성화전화효솔.[결과]옥미화의남개원생질분리적최가조건위:섬유소매1.5％,리석매0.5％;의남개매해4h,감로순농도0.4 mol/L;옥미매해6h,감로순농도0.45 ～0.50 mol/L.최가생장시기위:의남개6～8편협;옥미이편협.용거내독소질립경PEG(옥미30％ PEG,의남개40％ PEG)유도전화치우흑암하배양,원생질체활성화전화효솔교고,원생질체중가이관찰도명현적GFP형광.[결론]옥미화의남개원생질체적제비수매농도,해리시간화삼투압적영향,재원생질체전화과정중,질립DNA순도,PEG농도등시영향전화효솔적관건인소,여의남개원생질체상비옥미원생질체요은정성차일사.