CAJ | 학술논문

目的：探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1（Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）启动子荧光素酶表达质粒构建中扩增、转化、酶切及连接的问题。方法利用PCR技术扩增1100 bp长度PAI-1启动子片段，与PUC-19T载体连接，将PUC19T-PAI-11100质粒，及荧光素酶报告基因pGL3-Basic质粒转染大肠肝菌（DH5a）后扩增，提取并纯化；以BglⅡ，MluⅠ酶切，电泳并回收PAI-11100片段和pGL3-Basic酶切大片段，将PAI-11100片段插入荧光素酶报告基因pGL3-Basic中，构建含PAI-11100片段荧光素酶质粒。结果扩增PAI-11100 bp片段成功，目的片段与载体PUC19T，pGL3-Basic载体连接条件较苛刻，需要增加连接时间及效率的摸索。结论控制扩增时DNA浓度，胶回收，感受态质量，LB平板质量，内切酶，连接时间及质量比等问题都可增加连接成功概率。
목적：탐토섬용매원격활물억제제-1（Plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1）계동자형광소매표체질립구건중확증、전화、매절급련접적문제。방법이용PCR기술확증1100 bp장도PAI-1계동자편단，여PUC-19T재체련접，장PUC19T-PAI-11100질립，급형광소매보고기인pGL3-Basic질립전염대장간균（DH5a）후확증，제취병순화；이BglⅡ，MluⅠ매절，전영병회수PAI-11100편단화pGL3-Basic매절대편단，장PAI-11100편단삽입형광소매보고기인pGL3-Basic중，구건함PAI-11100편단형광소매질립。결과확증PAI-11100 bp편단성공，목적편단여재체PUC19T，pGL3-Basic재체련접조건교가각，수요증가련접시간급효솔적모색。결론공제확증시DNA농도，효회수，감수태질량，LB평판질량，내절매，련접시간급질량비등문제도가증가련접성공개솔。