CAJ | 학술논문

本研究旨在利用红细胞自然沉降性原理,以传统的全骨髓贴壁法为基础,探讨一种改良后简便而高效的人骨髓间充质干细胞培养方法.采用6孔板培养细胞,将骨髓标本用MSC完全培养液培养48 h,吸取上层无红细胞的上清层,置于新的培养孔以分离获取MSC.用倒置显微镜观察细胞形态及贴壁情况,记录细胞首次贴壁时间、首次传代时间,并以传统全骨髓贴壁法为对照;应用流式细胞术检测细胞周期、细胞表面标记;用油红O及碱性磷酸酶试剂盒分别对MSC成脂、成骨能力进行鉴定;应用计数板计数法描绘第1代,第3代,第5代MSC增殖曲线.结果表明,用改良法培养的MSC高表达CD90、CD105、CD13、CD44,低表达CD14、CD45、CD34;细胞周期中G0/G1期88.76％,G2/M期3.04％,S期8.2％,符合干细胞周期特征;增殖曲线呈典型“S”型;油红O与碱性磷酸酶染色均为阳性.同时与传统方法相比,改良方法的细胞贴壁率显著高于传统方法(P =0.0004),首次贴壁时间短(P＜0.0001)、首次传代时间短(P =0.001).结论:骨髓标本培养48 h后的上清层中含大量贴壁活性的悬浮MSC,改良方法是一种比传统贴壁法更具有便捷、高效等优点的培养方法.
본연구지재이용홍세포자연침강성원리,이전통적전골수첩벽법위기출,탐토일충개량후간편이고효적인골수간충질간세포배양방법.채용6공판배양세포,장골수표본용MSC완전배양액배양48 h,흡취상층무홍세포적상청층,치우신적배양공이분리획취MSC.용도치현미경관찰세포형태급첩벽정황,기록세포수차첩벽시간、수차전대시간,병이전통전골수첩벽법위대조;응용류식세포술검측세포주기、세포표면표기;용유홍O급감성린산매시제합분별대MSC성지、성골능력진행감정;응용계수판계수법묘회제1대,제3대,제5대MSC증식곡선.결과표명,용개량법배양적MSC고표체CD90、CD105、CD13、CD44,저표체CD14、CD45、CD34;세포주기중G0/G1기88.76％,G2/M기3.04％,S기8.2％,부합간세포주기특정;증식곡선정전형“S”형;유홍O여감성린산매염색균위양성.동시여전통방법상비,개량방법적세포첩벽솔현저고우전통방법(P =0.0004),수차첩벽시간단(P＜0.0001)、수차전대시간단(P =0.001).결론:골수표본배양48 h후적상청층중함대량첩벽활성적현부MSC,개량방법시일충비전통첩벽법경구유편첩、고효등우점적배양방법.