CAJ | 학술논문

本研究探讨NANOG基因在人急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞中的表达并构建特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体.利用RT-PCR及Western blot技术检测MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat等ALL细胞系及在我院住院治疗的15例新诊断的ALL患者骨髓细胞中NANOG的表达情况.通过构建携带NANOG特异性shRNA的慢病毒载体包装病毒颗粒,感染MOLT-4细胞后经分选获得稳定表达株,并在基因及蛋白水平检测NANOG干扰效率.结果表明,MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及33.3％的ALL患者中可见NANOG基因mRNA的扩增产物及蛋白表达.测序表明,ALL患者及MOLT-4、CCRF-HSB2细胞主要表达NANOGP8 mRNA.构建慢病毒干扰质粒pLB-shNANOG-1、pLB-shNANOG-2及pLB-shcontrol,包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.83-3.12) ×108 IU/ml.病毒感染MOLT-4细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞.实时定量PCR及Western blot证实,两种shRNA可有效下调NANOG基因及蛋白的表达.结论:MOLT-4细胞、CCRF-HSB2细胞以及部分ALL患者骨髓细胞中存在NANOG的表达,其主要为NANOGP8 mRNA的转录.成功构建了特异性干扰NANOG表达的慢病毒载体,获得可稳定下调NANOG表达的MOLT-4细胞株.
본연구탐토NANOG기인재인급성림파세포백혈병(ALL)세포중적표체병구건특이성간우NANOG표체적만병독재체.이용RT-PCR급Western blot기술검측MOLT-4、CCRF-HSB2、Jurkat등ALL세포계급재아원주원치료적15례신진단적ALL환자골수세포중NANOG적표체정황.통과구건휴대NANOG특이성shRNA적만병독재체포장병독과립,감염MOLT-4세포후경분선획득은정표체주,병재기인급단백수평검측NANOG간우효솔.결과표명,MOLT-4세포、CCRF-HSB2세포이급33.3％적ALL환자중가견NANOG기인mRNA적확증산물급단백표체.측서표명,ALL환자급MOLT-4、CCRF-HSB2세포주요표체NANOGP8 mRNA.구건만병독간우질립pLB-shNANOG-1、pLB-shNANOG-2급pLB-shcontrol,포장병독과립초속리심후병독적도체(1.83-3.12) ×108 IU/ml.병독감염MOLT-4세포후경류식세포의분선획득GFP+세포.실시정량PCR급Western blot증실,량충shRNA가유효하조NANOG기인급단백적표체.결론:MOLT-4세포、CCRF-HSB2세포이급부분ALL환자골수세포중존재NANOG적표체,기주요위NANOGP8 mRNA적전록.성공구건료특이성간우NANOG표체적만병독재체,획득가은정하조NANOG표체적MOLT-4세포주.