工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2014年
2期
14-19
,共6页
余越春%崔文璟%刘义%周哲敏
餘越春%崔文璟%劉義%週哲敏
여월춘%최문경%류의%주철민
腈水合酶%核糖体结合位点%调控蛋白%重组表达%蛋白质纯化
腈水閤酶%覈糖體結閤位點%調控蛋白%重組錶達%蛋白質純化
정수합매%핵당체결합위점%조공단백%중조표체%단백질순화
nitrile hydratase%ribosome binding site%activator%protein expression%protein purification
针对红球菌低分子量腈水合酶(L-NHase)在重组菌中难以表达这一问题,通过对其α亚基及调控蛋白NhlE基因的核糖体结合位点和α,β亚基间隔序列的长度进行改造,构建了重组表达载体,实现了L-NHase及其调控蛋白NhlE在E.coli BL21(DE3)中过量表达.通过培养条件优化,得到最佳表达条件为:37℃培养菌体浓度(OD6000)到1.0时,加入终浓度为0.1 g/L的CoCl2·6H20,0.6 mmol/L的IPTG,然后在24℃下诱导表达24 h.最终得到的重组蛋白粗酶液的活性为(109.9±5.5)U/mg.采用Strep-tag/Strep-Tactin亲和层析简化了L-NHase的纯化方法,本研究结果为一些难于异源重组表达的多亚基蛋白质的表达具有一定的借鉴意义.
針對紅毬菌低分子量腈水閤酶(L-NHase)在重組菌中難以錶達這一問題,通過對其α亞基及調控蛋白NhlE基因的覈糖體結閤位點和α,β亞基間隔序列的長度進行改造,構建瞭重組錶達載體,實現瞭L-NHase及其調控蛋白NhlE在E.coli BL21(DE3)中過量錶達.通過培養條件優化,得到最佳錶達條件為:37℃培養菌體濃度(OD6000)到1.0時,加入終濃度為0.1 g/L的CoCl2·6H20,0.6 mmol/L的IPTG,然後在24℃下誘導錶達24 h.最終得到的重組蛋白粗酶液的活性為(109.9±5.5)U/mg.採用Strep-tag/Strep-Tactin親和層析簡化瞭L-NHase的純化方法,本研究結果為一些難于異源重組錶達的多亞基蛋白質的錶達具有一定的藉鑒意義.
침대홍구균저분자량정수합매(L-NHase)재중조균중난이표체저일문제,통과대기α아기급조공단백NhlE기인적핵당체결합위점화α,β아기간격서렬적장도진행개조,구건료중조표체재체,실현료L-NHase급기조공단백NhlE재E.coli BL21(DE3)중과량표체.통과배양조건우화,득도최가표체조건위:37℃배양균체농도(OD6000)도1.0시,가입종농도위0.1 g/L적CoCl2·6H20,0.6 mmol/L적IPTG,연후재24℃하유도표체24 h.최종득도적중조단백조매액적활성위(109.9±5.5)U/mg.채용Strep-tag/Strep-Tactin친화층석간화료L-NHase적순화방법,본연구결과위일사난우이원중조표체적다아기단백질적표체구유일정적차감의의.
