北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2014年
3期
483-487
,共5页
王琳琳%杨娜%袁悦%任爱国
王琳琳%楊娜%袁悅%任愛國
왕림림%양나%원열%임애국
叶酸受体%自身抗体%酶联免疫吸附试验%免疫球蛋白G
葉痠受體%自身抗體%酶聯免疫吸附試驗%免疫毬蛋白G
협산수체%자신항체%매련면역흡부시험%면역구단백G
Folate receptor%Autoantibodies%Enzyme-linked immunosorbent assay%Immunoglobulin G
目的：建立血浆叶酸受体自身抗体免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）的酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA）检测方法，并对其进行评价。方法：从正常人的胎盘样品中提取叶酸受体蛋白并将其纯化，以纯化的人源叶酸受体蛋白为包被蛋白，以单克隆抗体为检测二抗，建立血浆叶酸受体自身抗体IgG的间接ELISA检测方法，评价其灵敏度、精密度及稳定性。随机选取24例血浆标本，同时以商品化的牛源叶酸结合蛋白与本方法中提取的人源叶酸受体蛋白作为包被蛋白，采用ELISA方法分别检测血浆中叶酸受体抗体IgG的水平，比较两种方法的检测结果。结果：标准曲线可检测的IgG浓度范围为6．25×10-4～8．00×10-2（标准品采用健康人混合血浆，IgG浓度定为1），最低检测限为3．13×10-4，批内差异为2．74％～8．07％，批间差异为4．16％～8．23％。同一样本不同稀释倍数下IgG的检测结果均在可接受范围内，结果较稳定。血浆标本的牛源包被蛋白与人源包被蛋白检测方法对比结果显示两种方法高度相关，相关系数为0．954（P＜0．001）；人源包被蛋白检测结果比牛源包被蛋白高14％。结论：成功建立以人源叶酸受体蛋白作为包被蛋白、针对血浆叶酸受体自身抗体IgG水平的ELISA检测方法，该方法检测灵敏，重复性好，可用于大样本量的人群检测。
目的：建立血漿葉痠受體自身抗體免疫毬蛋白G（immunoglobulin G，IgG）的酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA）檢測方法，併對其進行評價。方法：從正常人的胎盤樣品中提取葉痠受體蛋白併將其純化，以純化的人源葉痠受體蛋白為包被蛋白，以單剋隆抗體為檢測二抗，建立血漿葉痠受體自身抗體IgG的間接ELISA檢測方法，評價其靈敏度、精密度及穩定性。隨機選取24例血漿標本，同時以商品化的牛源葉痠結閤蛋白與本方法中提取的人源葉痠受體蛋白作為包被蛋白，採用ELISA方法分彆檢測血漿中葉痠受體抗體IgG的水平，比較兩種方法的檢測結果。結果：標準麯線可檢測的IgG濃度範圍為6．25×10-4～8．00×10-2（標準品採用健康人混閤血漿，IgG濃度定為1），最低檢測限為3．13×10-4，批內差異為2．74％～8．07％，批間差異為4．16％～8．23％。同一樣本不同稀釋倍數下IgG的檢測結果均在可接受範圍內，結果較穩定。血漿標本的牛源包被蛋白與人源包被蛋白檢測方法對比結果顯示兩種方法高度相關，相關繫數為0．954（P＜0．001）；人源包被蛋白檢測結果比牛源包被蛋白高14％。結論：成功建立以人源葉痠受體蛋白作為包被蛋白、針對血漿葉痠受體自身抗體IgG水平的ELISA檢測方法，該方法檢測靈敏，重複性好，可用于大樣本量的人群檢測。
목적：건립혈장협산수체자신항체면역구단백G（immunoglobulin G，IgG）적매련면역흡부시험（enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA）검측방법，병대기진행평개。방법：종정상인적태반양품중제취협산수체단백병장기순화，이순화적인원협산수체단백위포피단백，이단극륭항체위검측이항，건립혈장협산수체자신항체IgG적간접ELISA검측방법，평개기령민도、정밀도급은정성。수궤선취24례혈장표본，동시이상품화적우원협산결합단백여본방법중제취적인원협산수체단백작위포피단백，채용ELISA방법분별검측혈장중협산수체항체IgG적수평，비교량충방법적검측결과。결과：표준곡선가검측적IgG농도범위위6．25×10-4～8．00×10-2（표준품채용건강인혼합혈장，IgG농도정위1），최저검측한위3．13×10-4，비내차이위2．74％～8．07％，비간차이위4．16％～8．23％。동일양본불동희석배수하IgG적검측결과균재가접수범위내，결과교은정。혈장표본적우원포피단백여인원포피단백검측방법대비결과현시량충방법고도상관，상관계수위0．954（P＜0．001）；인원포피단백검측결과비우원포피단백고14％。결론：성공건립이인원협산수체단백작위포피단백、침대혈장협산수체자신항체IgG수평적ELISA검측방법，해방법검측령민，중복성호，가용우대양본량적인군검측。
Objective:To establish and evaluate a newly established method of enzyme-linked immu-nosorbent assay (ELISA) for measuring human autoantibody to folate receptor (FR).Methods: Folate receptor was extracted and purified from healthy woman placenta tissues .The protein was coated on 96-well plates.Goat monoclonal antibody was used as detecting antibody to set up the indirect ELISA proce -dure.The sensitivity, precision and linearity of the method were evaluated .Further, the method was compared with the ELISA method with commercialized bovine folate binding protein ( FBP) by determi-ning autoantibody levels in 24 individuals .Results:The measuring range of the standard curve was from 6 .25 ×10 -4 to 8 ×10 -2 ( the IgG concentration of pooled plasma from healthy donors was defined as 1 ) . The lowest detectable level was 3.13 ×10 -4 .The intra-and inter-assay coefficients of variations were 2.74%-8.07% and 4.16% -8.23%, respectively.Linearity test results were considered within acceptable limits.The data from FBP-ELISA and FR-ELISA were highly correlated ( r=0.954, P <0.001);The value from FR-ELISA was higher by 14% than that from FBP-ELISA.Conclusion: The ELISA method for measuring human autoantibody IgG to folate receptor was successfully established using human FR as coating protein .The method is sensitive and repeatable and can be used in large-scale population study .
