首都师范大学学报（自然科学版）
首都師範大學學報（自然科學版）
수도사범대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF CAPITAL NORMAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
4期
36-41
,共6页
张衍泉%余秀琴%王丽莉%廖尚英%朱宝长
張衍泉%餘秀琴%王麗莉%廖尚英%硃寶長
장연천%여수금%왕려리%료상영%주보장
Sry基因%质粒构建%真核表达
Sry基因%質粒構建%真覈錶達
Sry기인%질립구건%진핵표체
目的:构建真核表达重组质粒pCR3.1-Sry.并检验其在真核细胞内的表达.方法:用PCR法从小鼠基因组中扩增出Sty全长基因,重组入pMD18-T载体,酶切鉴定重组质粒,对酶切正确的重组质粒测序.双酶切测序验证的重组质粒.将切下的片段与真核表达质粒pCR3.1相连构建pCR3.1-Sty重组质粒.将其转染HeLa细胞后,RT-PCR法检测重组质粒在细胞中mRNA的转录;免疫荧光法检测重组质粒在细胞中蛋白质的表达.结果:PCR法扩增得到了1.2 kb的特异性Sry基因片段;成功地构建了真核表达重组质粒pCR3.1-Sry;重组质粒pCR3.1-Sry在HeLa细胞中mRNA及蛋白水平均可检测到表达.结论:重组质粒构建成功并可以在体外真核细胞中表达,为进一步研究其作为核酸疫茁的免疫作用提供了可控的实验材料.
目的:構建真覈錶達重組質粒pCR3.1-Sry.併檢驗其在真覈細胞內的錶達.方法:用PCR法從小鼠基因組中擴增齣Sty全長基因,重組入pMD18-T載體,酶切鑒定重組質粒,對酶切正確的重組質粒測序.雙酶切測序驗證的重組質粒.將切下的片段與真覈錶達質粒pCR3.1相連構建pCR3.1-Sty重組質粒.將其轉染HeLa細胞後,RT-PCR法檢測重組質粒在細胞中mRNA的轉錄;免疫熒光法檢測重組質粒在細胞中蛋白質的錶達.結果:PCR法擴增得到瞭1.2 kb的特異性Sry基因片段;成功地構建瞭真覈錶達重組質粒pCR3.1-Sry;重組質粒pCR3.1-Sry在HeLa細胞中mRNA及蛋白水平均可檢測到錶達.結論:重組質粒構建成功併可以在體外真覈細胞中錶達,為進一步研究其作為覈痠疫茁的免疫作用提供瞭可控的實驗材料.
목적:구건진핵표체중조질립pCR3.1-Sry.병검험기재진핵세포내적표체.방법:용PCR법종소서기인조중확증출Sty전장기인,중조입pMD18-T재체,매절감정중조질립,대매절정학적중조질립측서.쌍매절측서험증적중조질립.장절하적편단여진핵표체질립pCR3.1상련구건pCR3.1-Sty중조질립.장기전염HeLa세포후,RT-PCR법검측중조질립재세포중mRNA적전록;면역형광법검측중조질립재세포중단백질적표체.결과:PCR법확증득도료1.2 kb적특이성Sry기인편단;성공지구건료진핵표체중조질립pCR3.1-Sry;중조질립pCR3.1-Sry재HeLa세포중mRNA급단백수평균가검측도표체.결론:중조질립구건성공병가이재체외진핵세포중표체,위진일보연구기작위핵산역촬적면역작용제공료가공적실험재료.
