中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
7期
78-86
,共9页
肺结核%DNA%疫苗%siRNA%融合抗原%hIL-12
肺結覈%DNA%疫苗%siRNA%融閤抗原%hIL-12
폐결핵%DNA%역묘%siRNA%융합항원%hIL-12
目的:评估整合siRNA、融合抗原基因、hIL-12的新型肺结核DNA疫苗在人胚肾细胞293中三个表达单元独立互不干扰表达.方法 在已构建含有靶向抗调亡基因Mcl-1L的siRNA、结核分枝杆菌抗原基因Ag85B-ESAT6(PVAE)、hIL-12三个独立表达单位的新型肺结核DNA疫苗pVAX-siRNA-PVAE-IL-12基础之上,将抗原基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合,得到真核表达质粒pVAX1-siRNA-PVAE[EGFP]-hiL12.并将DNA疫苗中的靶向抗凋亡基因Mcl-1L的序列置换为靶向EGFP基因的siRNA序列[siEGFP],得到pVAX1-[siEGFP]-PVAE[EGFP]-hiL12表达质粒.用质粒pVAX1-siRNA-PVAE[EGFP]-hIL-12、pVAX1-[siEGFP]-PVAE[EGFP].hiL12转染人胚肾细胞293,以EGFP为报告基因,分别证实融合抗原基因与siRNA编码序列的表达.以ELISA测定培养细胞上清中hIL-12的表达.结果 经酶切鉴定和测序证实肺结核DNA疫苗改造成功.转染细胞中检测到绿色荧光,证实了融合抗原基因的表达.对照组证实了siRNA编码序列表达的抑制效果.转染48h后细胞培养液中hIL-12的检出量为1571.63 pg/ml;72h后细胞培养液中hIL-12的检出量为2392.25pg/ml.结论 已构建的肺结核DNA疫苗能在真核细胞中有效表达siRNA、抗原基因与hIL-12.为进一步研究该DNA疫苗抗肺结核的免疫保护率和基因治疗效果打下基础.
目的:評估整閤siRNA、融閤抗原基因、hIL-12的新型肺結覈DNA疫苗在人胚腎細胞293中三箇錶達單元獨立互不榦擾錶達.方法 在已構建含有靶嚮抗調亡基因Mcl-1L的siRNA、結覈分枝桿菌抗原基因Ag85B-ESAT6(PVAE)、hIL-12三箇獨立錶達單位的新型肺結覈DNA疫苗pVAX-siRNA-PVAE-IL-12基礎之上,將抗原基因與增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因融閤,得到真覈錶達質粒pVAX1-siRNA-PVAE[EGFP]-hiL12.併將DNA疫苗中的靶嚮抗凋亡基因Mcl-1L的序列置換為靶嚮EGFP基因的siRNA序列[siEGFP],得到pVAX1-[siEGFP]-PVAE[EGFP]-hiL12錶達質粒.用質粒pVAX1-siRNA-PVAE[EGFP]-hIL-12、pVAX1-[siEGFP]-PVAE[EGFP].hiL12轉染人胚腎細胞293,以EGFP為報告基因,分彆證實融閤抗原基因與siRNA編碼序列的錶達.以ELISA測定培養細胞上清中hIL-12的錶達.結果 經酶切鑒定和測序證實肺結覈DNA疫苗改造成功.轉染細胞中檢測到綠色熒光,證實瞭融閤抗原基因的錶達.對照組證實瞭siRNA編碼序列錶達的抑製效果.轉染48h後細胞培養液中hIL-12的檢齣量為1571.63 pg/ml;72h後細胞培養液中hIL-12的檢齣量為2392.25pg/ml.結論 已構建的肺結覈DNA疫苗能在真覈細胞中有效錶達siRNA、抗原基因與hIL-12.為進一步研究該DNA疫苗抗肺結覈的免疫保護率和基因治療效果打下基礎.
목적:평고정합siRNA、융합항원기인、hIL-12적신형폐결핵DNA역묘재인배신세포293중삼개표체단원독립호불간우표체.방법 재이구건함유파향항조망기인Mcl-1L적siRNA、결핵분지간균항원기인Ag85B-ESAT6(PVAE)、hIL-12삼개독립표체단위적신형폐결핵DNA역묘pVAX-siRNA-PVAE-IL-12기출지상,장항원기인여증강형록색형광단백(EGFP)기인융합,득도진핵표체질립pVAX1-siRNA-PVAE[EGFP]-hiL12.병장DNA역묘중적파향항조망기인Mcl-1L적서렬치환위파향EGFP기인적siRNA서렬[siEGFP],득도pVAX1-[siEGFP]-PVAE[EGFP]-hiL12표체질립.용질립pVAX1-siRNA-PVAE[EGFP]-hIL-12、pVAX1-[siEGFP]-PVAE[EGFP].hiL12전염인배신세포293,이EGFP위보고기인,분별증실융합항원기인여siRNA편마서렬적표체.이ELISA측정배양세포상청중hIL-12적표체.결과 경매절감정화측서증실폐결핵DNA역묘개조성공.전염세포중검측도록색형광,증실료융합항원기인적표체.대조조증실료siRNA편마서렬표체적억제효과.전염48h후세포배양액중hIL-12적검출량위1571.63 pg/ml;72h후세포배양액중hIL-12적검출량위2392.25pg/ml.결론 이구건적폐결핵DNA역묘능재진핵세포중유효표체siRNA、항원기인여hIL-12.위진일보연구해DNA역묘항폐결핵적면역보호솔화기인치료효과타하기출.
