中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
7期
53-57
,共5页
简中友%贾赟%王全凯%胡传伟%肇慧君%李叶
簡中友%賈赟%王全凱%鬍傳偉%肇慧君%李葉
간중우%가빈%왕전개%호전위%조혜군%리협
犬瘟热病毒%核蛋白%原核表达%免疫原性
犬瘟熱病毒%覈蛋白%原覈錶達%免疫原性
견온열병독%핵단백%원핵표체%면역원성
应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,将其TA克隆至pMD18-T载体中,再利用酶切、连接的方法将测序正确的N基因目的片段亚克隆到原核表达载体pET24b中6×His Tag编码基因的上游,并将该重组质粒转化大肠杆菌Rosetta 2(DE3)株,经IPTG诱导,N基因融合蛋白获得了高效表达.SDS-PAGE分析和Westernblot分析的结果显示,表达产物的分子质量为15 kDa,与CDV标准阳性血清呈阳性反应,间接ELISA结果也表明重组表达产物具有良好的抗原性,能够有效区分CDV标准阳性与阴性血清,表明大肠杆菌表达的CDV N蛋白在免疫原性上具有与天然N蛋白同样的特性,可作为检测CDV的间接ELISA包被抗原.
應用RT-PCR技術擴增齣犬瘟熱病毒(CDV)覈衣殼(N)蛋白基因抗原性好的高保守基因片段,將其TA剋隆至pMD18-T載體中,再利用酶切、連接的方法將測序正確的N基因目的片段亞剋隆到原覈錶達載體pET24b中6×His Tag編碼基因的上遊,併將該重組質粒轉化大腸桿菌Rosetta 2(DE3)株,經IPTG誘導,N基因融閤蛋白穫得瞭高效錶達.SDS-PAGE分析和Westernblot分析的結果顯示,錶達產物的分子質量為15 kDa,與CDV標準暘性血清呈暘性反應,間接ELISA結果也錶明重組錶達產物具有良好的抗原性,能夠有效區分CDV標準暘性與陰性血清,錶明大腸桿菌錶達的CDV N蛋白在免疫原性上具有與天然N蛋白同樣的特性,可作為檢測CDV的間接ELISA包被抗原.
응용RT-PCR기술확증출견온열병독(CDV)핵의각(N)단백기인항원성호적고보수기인편단,장기TA극륭지pMD18-T재체중,재이용매절、련접적방법장측서정학적N기인목적편단아극륭도원핵표체재체pET24b중6×His Tag편마기인적상유,병장해중조질립전화대장간균Rosetta 2(DE3)주,경IPTG유도,N기인융합단백획득료고효표체.SDS-PAGE분석화Westernblot분석적결과현시,표체산물적분자질량위15 kDa,여CDV표준양성혈청정양성반응,간접ELISA결과야표명중조표체산물구유량호적항원성,능구유효구분CDV표준양성여음성혈청,표명대장간균표체적CDV N단백재면역원성상구유여천연N단백동양적특성,가작위검측CDV적간접ELISA포피항원.
