中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2008年
7期
21-25
,共5页
周明乾%林来兴妹%胡志明%苏华%徐翠香%高基民
週明乾%林來興妹%鬍誌明%囌華%徐翠香%高基民
주명건%림래흥매%호지명%소화%서취향%고기민
绿色荧光蛋白%链亲和素%融合蛋白%肿瘤细胞%锚定
綠色熒光蛋白%鏈親和素%融閤蛋白%腫瘤細胞%錨定
록색형광단백%련친화소%융합단백%종류세포%묘정
GFP(绿色荧光蛋白)-SA(链亲和素)双功能融合蛋白的制备及其鉴定研究,以展示所建立的技术平台,即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞表面进行高效的锚定修饰.构建原核表达载体pET24d/GFP-SA转化大肠杆茵BL21(DE3).用IPTG诱导重组蛋白的表达,用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化.用制备的GFP-SA双功能融合蛋白,对B16肿瘤细胞已生物素化的细胞表面进行修饰,经荧光显微镜和流式细胞仪进行修饰效率分析.此外,用MTT法检测细胞表面修饰对肿瘤细胞活力及其生长情况的影响.GFP-SA重组融合蛋白在大肠杆菌实现了高效表达(约占细菌总蛋白的20%),通过纯化和复性制备的GFP-SA双功能融合蛋白具有双重活性,即:链亲和素介导的、对生物素高效特异的结合活性,和GFP发射绿色荧光的活性,并能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞.此外,GFP-SA双功能融合蛋白的细胞表面修饰对细胞的活力及其生长无显著影响.GFP-SA融合蛋白能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞,可用作肿瘤疫苗研究的示踪蛋白及实验对照体系.
GFP(綠色熒光蛋白)-SA(鏈親和素)雙功能融閤蛋白的製備及其鑒定研究,以展示所建立的技術平檯,即用含鏈親和素的雙功能融閤蛋白對生物素化的細胞錶麵進行高效的錨定脩飾.構建原覈錶達載體pET24d/GFP-SA轉化大腸桿茵BL21(DE3).用IPTG誘導重組蛋白的錶達,用鎳金屬螯閤(Ni-NTA)層析柱進行純化.用製備的GFP-SA雙功能融閤蛋白,對B16腫瘤細胞已生物素化的細胞錶麵進行脩飾,經熒光顯微鏡和流式細胞儀進行脩飾效率分析.此外,用MTT法檢測細胞錶麵脩飾對腫瘤細胞活力及其生長情況的影響.GFP-SA重組融閤蛋白在大腸桿菌實現瞭高效錶達(約佔細菌總蛋白的20%),通過純化和複性製備的GFP-SA雙功能融閤蛋白具有雙重活性,即:鏈親和素介導的、對生物素高效特異的結閤活性,和GFP髮射綠色熒光的活性,併能高效脩飾錶麵已生物素化的腫瘤細胞.此外,GFP-SA雙功能融閤蛋白的細胞錶麵脩飾對細胞的活力及其生長無顯著影響.GFP-SA融閤蛋白能高效脩飾錶麵已生物素化的腫瘤細胞,可用作腫瘤疫苗研究的示蹤蛋白及實驗對照體繫.
GFP(록색형광단백)-SA(련친화소)쌍공능융합단백적제비급기감정연구,이전시소건립적기술평태,즉용함련친화소적쌍공능융합단백대생물소화적세포표면진행고효적묘정수식.구건원핵표체재체pET24d/GFP-SA전화대장간인BL21(DE3).용IPTG유도중조단백적표체,용얼금속오합(Ni-NTA)층석주진행순화.용제비적GFP-SA쌍공능융합단백,대B16종류세포이생물소화적세포표면진행수식,경형광현미경화류식세포의진행수식효솔분석.차외,용MTT법검측세포표면수식대종류세포활력급기생장정황적영향.GFP-SA중조융합단백재대장간균실현료고효표체(약점세균총단백적20%),통과순화화복성제비적GFP-SA쌍공능융합단백구유쌍중활성,즉:련친화소개도적、대생물소고효특이적결합활성,화GFP발사록색형광적활성,병능고효수식표면이생물소화적종류세포.차외,GFP-SA쌍공능융합단백적세포표면수식대세포적활력급기생장무현저영향.GFP-SA융합단백능고효수식표면이생물소화적종류세포,가용작종류역묘연구적시종단백급실험대조체계.
