CAJ | 학술논문

目的观察多球壳菌素(ISP-1)对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用,研究ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响.方法体外培养大鼠GMC,加入100 μmol/L ISP-1干预,分别于作用6、12、24、48 h后以流式细胞术检测GMC凋亡,Hoechst33258/PI染色观察凋亡细胞形态变化,琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象,并通过SuperArray Real-TimePCR细胞周期基因芯片测定ISP-1对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,Western blotting法观察Bax和Bcl-2蛋白的表达.结果 ISP-1可显著诱导GMC凋亡,并呈一定的时间依赖性,作用48 h后细胞凋亡最显著,Hoechst33258/PI荧光染色法可见亮蓝色的凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现;PCR细胞周期基因芯片检测结果发现ISP-1可显著上调GMC Rad51、Atm、Brcal、Caspase3、cyelinA2、cyclinC、chek1、cyclinB1、cyclinB2、cyclinD2、cyclinF、Cdc25a和P27等一些与DNA损伤、凋亡和细胞周期调节蛋白相关的基因的表达;Westernblotting发现ISP-1可显著上调GMC Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达.结论 ISP-1可时间依赖性诱导体外培养的正常大鼠GMC凋亡,其机制与影响细胞周期调节蛋白及凋亡相关基因的表达有关.
목적 관찰다구각균소(ISP-1)대체외배양적정상대서신소구계막세포(GMC)적촉조망작용,연구ISP-1대세포주기조절단백기인표체보화조망상관단백Bax、Bcl-2표체적영향.방법 체외배양대서GMC,가입100 μmol/L ISP-1간예,분별우작용6、12、24、48 h후이류식세포술검측GMC조망,Hoechst33258/PI염색관찰조망세포형태변화,경지당DNA응효전영법관찰조망세포핵소체DNA적단렬현상,병통과SuperArray Real-TimePCR세포주기기인심편측정ISP-1대세포주기조절단백기인표체보적영향,Western blotting법관찰Bax화Bcl-2단백적표체.결과 ISP-1가현저유도GMC조망,병정일정적시간의뢰성,작용48 h후세포조망최현저,Hoechst33258/PI형광염색법가견량람색적조망소체,경지당응효전영가견조망제도적출현;PCR세포주기기인심편검측결과발현ISP-1가현저상조GMC Rad51、Atm、Brcal、Caspase3、cyelinA2、cyclinC、chek1、cyclinB1、cyclinB2、cyclinD2、cyclinF、Cdc25a화P27등일사여DNA손상、조망화세포주기조절단백상관적기인적표체;Westernblotting발현ISP-1가현저상조GMC Bax단백표체,하조Bcl-2단백표체.결론 ISP-1가시간의뢰성유도체외배양적정상대서GMC조망,기궤제여영향세포주기조절단백급조망상관기인적표체유관.