CAJ | 학술논문

目的研究携带肝细胞生长因子基因的重组质粒(pUDKH)经肌肉注射给药后在大鼠体内的组织分布及其与大鼠基因组DNA的整合情况.方法二级Wistar大鼠雌雄各20只,按体重和取样时间的不同随机分为12h、24 h、3 d、7 d、14d、21 d的各实验组(给予pUDKH,2.0mg/kg)和注射后3 d取样的对照组(给予PBS,200μl/只),依次将各组大鼠摘眼球取血后脱臼处死,按脑、心、肺、胸腺、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、脾、肾、生殖腺、左腿肌肉、右腿肌肉的顺序取样.经典酚,氯仿抽提法提取各组织总DNA,应用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,PCR方法检测其中的β肌动蛋白基因;巢式PCR检测各组织总DNA中pUDKH的分布情况;ApaL I酶切分离pUDKH分布阳性各组织中的pUDKHDNA和基因组DNA,巢式PCR检测pUDKH DNA与基因组DNA的整合情况.结果各组织总DNA浓度与纯度均符合实验需要,并适于采用PCR或巢式PCR方法进行体内组织分布及基因组DNA整合情况检测.巢式PCR检测显示,在各时间点的右腿肌肉与外周血、注射后3和7 d的肝脏、3和14 d的生殖腺、7 d的胸腺、7和14 d的MLN与左腿肌肉等组织中pUDKH分布均呈阳性,而在各时间点的脑、心、肺、脾、肾等组织中pUDKH分布均呈阴性.pUDKH分布阳性的各组织中均未检测到pUDKH DNA与基因组DNA的整合.结论 pUDKH经肌肉注射给药后,在各时间点大鼠体内各组织中呈现不同的分布谱.在pUDKH分布阳性的各组织中,pUDKH DNA与基因组DNA发生随机整合的概率较低.
목적 연구휴대간세포생장인자기인적중조질립(pUDKH)경기육주사급약후재대서체내적조직분포급기여대서기인조DNA적정합정황.방법 이급Wistar대서자웅각20지,안체중화취양시간적불동수궤분위12h、24 h、3 d、7 d、14d、21 d적각실험조(급여pUDKH,2.0mg/kg)화주사후3 d취양적대조조(급여PBS,200μl/지),의차장각조대서적안구취혈후탈구처사,안뇌、심、폐、흉선、간、장계막림파결(MLN)、비、신、생식선、좌퇴기육、우퇴기육적순서취양.경전분,록방추제법제취각조직총DNA,응용자외분광광도계측정기농도화순도,PCR방법검측기중적β기동단백기인;소식PCR검측각조직총DNA중pUDKH적분포정황;ApaL I매절분리pUDKH분포양성각조직중적pUDKHDNA화기인조DNA,소식PCR검측pUDKH DNA여기인조DNA적정합정황.결과 각조직총DNA농도여순도균부합실험수요,병괄우채용PCR혹소식PCR방법진행체내조직분포급기인조DNA정합정황검측.소식PCR검측현시,재각시간점적우퇴기육여외주혈、주사후3화7 d적간장、3화14 d적생식선、7 d적흉선、7화14 d적MLN여좌퇴기육등조직중pUDKH분포균정양성,이재각시간점적뇌、심、폐、비、신등조직중pUDKH분포균정음성.pUDKH분포양성적각조직중균미검측도pUDKH DNA여기인조DNA적정합.결론 pUDKH경기육주사급약후,재각시간점대서체내각조직중정현불동적분포보.재pUDKH분포양성적각조직중,pUDKH DNA여기인조DNA발생수궤정합적개솔교저.