CAJ | 학술논문

应用RT-PCR结合RACE技术,从青稞总RNA中扩增得长度为1 512 bp的甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因cDNA全长编码序列.通过氨基酸同源性比对,发现该序列的推定表达产物与大麦BADH同工酶BBD2的同源性为98.4%,而与小麦、玉米和水稻等禾本科作物的BADH同源性分别为97.0%、84.7%和85.1%.将克隆到的青稞cDNA序列命名为HvBADH1,投递到GenBank,获得收录号EF492983.HvBADH1可以在原核表达系统TB1-pMAL c2x中正常表达出分子量为54.2 kD的多肽链.将HvBADH1的编码ORF,插入到添加了植物表达CaMV 35S启动子和NospolyA终止子调控元件的植物表达载体pCAMBIA1301质粒相应的克隆位点中,构建了HvBADH1基因的农杆菌植物转化系统LBA4404(pCAM-ba).进而采用农杆菌介导法,将HvBADH1基因导入烟草中,对所获得的潮霉素抗性烟草株系进行PCR、Southern blot和RT-PCR等分子生物学榆测,结果表明,在得到的2个转基因株系中,HvBADH1基因已整合到受体植物基因组中,并且可以在mRNA水平上进行转录.
응용RT-PCR결합RACE기술,종청과총RNA중확증득장도위1 512 bp적첨채감철탈경매(BADH)기인cDNA전장편마서렬.통과안기산동원성비대,발현해서렬적추정표체산물여대맥BADH동공매BBD2적동원성위98.4%,이여소맥、옥미화수도등화본과작물적BADH동원성분별위97.0%、84.7%화85.1%.장극륭도적청과cDNA서렬명명위HvBADH1,투체도GenBank,획득수록호EF492983.HvBADH1가이재원핵표체계통TB1-pMAL c2x중정상표체출분자량위54.2 kD적다태련.장HvBADH1적편마ORF,삽입도첨가료식물표체CaMV 35S계동자화NospolyA종지자조공원건적식물표체재체pCAMBIA1301질립상응적극륭위점중,구건료HvBADH1기인적농간균식물전화계통LBA4404(pCAM-ba).진이채용농간균개도법,장HvBADH1기인도입연초중,대소획득적조매소항성연초주계진행PCR、Southern blot화RT-PCR등분자생물학유측,결과표명,재득도적2개전기인주계중,HvBADH1기인이정합도수체식물기인조중,병차가이재mRNA수평상진행전록.