中山大学学报（自然科学版）
中山大學學報（自然科學版）
중산대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI
2008年
4期
72-76,87
,共6页
陈庄%贝锦龙%廖玲%刘世贵
陳莊%貝錦龍%廖玲%劉世貴
진장%패금룡%료령%류세귀
植酸酶%烟曲霉%黑曲霉%蛋白酶水解%蛋白质工程
植痠酶%煙麯黴%黑麯黴%蛋白酶水解%蛋白質工程
식산매%연곡매%흑곡매%단백매수해%단백질공정
在烟曲霉植酸酶(Afp)的基因上,通过PCR逐步将编码1-47、178-237及338-381多肽序列的DNA片段置换为黑曲霉NRRL 3135植酸酶(Anp)中的对应片段,构建了3个嵌合体(嵌合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)基因,并在毕赤酵母中将其成功表达及纯化.所有的嵌合体和亲本植酸酶均能抵抗胃蛋白酶.在m(胰蛋白酶)/m(植酸酶)为0.1时,Anp完全失活;但Afp与所有嵌合体的活性仅损失13%～23%.胰蛋白酶水解产物的SDS-PAGE结果显示嵌合体Ⅱ与Ⅲ也能被胰蛋白酶严重水解,但非变性PAGE结果却表明它们在水解后仍能保持结构完整.嵌合体也具有一些与Anp及Afp相异的新pH曲线及耐热性.实验表明,通过替换基因片段改良真菌植酸酶可行.
在煙麯黴植痠酶(Afp)的基因上,通過PCR逐步將編碼1-47、178-237及338-381多肽序列的DNA片段置換為黑麯黴NRRL 3135植痠酶(Anp)中的對應片段,構建瞭3箇嵌閤體(嵌閤體Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ)基因,併在畢赤酵母中將其成功錶達及純化.所有的嵌閤體和親本植痠酶均能牴抗胃蛋白酶.在m(胰蛋白酶)/m(植痠酶)為0.1時,Anp完全失活;但Afp與所有嵌閤體的活性僅損失13%～23%.胰蛋白酶水解產物的SDS-PAGE結果顯示嵌閤體Ⅱ與Ⅲ也能被胰蛋白酶嚴重水解,但非變性PAGE結果卻錶明它們在水解後仍能保持結構完整.嵌閤體也具有一些與Anp及Afp相異的新pH麯線及耐熱性.實驗錶明,通過替換基因片段改良真菌植痠酶可行.
재연곡매식산매(Afp)적기인상,통과PCR축보장편마1-47、178-237급338-381다태서렬적DNA편단치환위흑곡매NRRL 3135식산매(Anp)중적대응편단,구건료3개감합체(감합체Ⅰ、Ⅱ화Ⅲ)기인,병재필적효모중장기성공표체급순화.소유적감합체화친본식산매균능저항위단백매.재m(이단백매)/m(식산매)위0.1시,Anp완전실활;단Afp여소유감합체적활성부손실13%～23%.이단백매수해산물적SDS-PAGE결과현시감합체Ⅱ여Ⅲ야능피이단백매엄중수해,단비변성PAGE결과각표명타문재수해후잉능보지결구완정.감합체야구유일사여Anp급Afp상이적신pH곡선급내열성.실험표명,통과체환기인편단개량진균식산매가행.
