寄生虫与医学昆虫学报
寄生蟲與醫學昆蟲學報
기생충여의학곤충학보
ACTA PARASITOLOGICA ET MEDICA ENTOMOLOGICA SINICA
2014年
2期
86-91
,共6页
耿美玲%郑峰%吕恒%朱进%胡丹%郝丽娜%张凤玉%龚秀芳%李丙军
耿美玲%鄭峰%呂恆%硃進%鬍丹%郝麗娜%張鳳玉%龔秀芳%李丙軍
경미령%정봉%려항%주진%호단%학려나%장봉옥%공수방%리병군
恙虫病东方体%抗原性%基因表达%抗原活性分析
恙蟲病東方體%抗原性%基因錶達%抗原活性分析
양충병동방체%항원성%기인표체%항원활성분석
Orientia tsutsugamushi%Antigenicity%Gene expression%immune-reactivity
本文获得恙虫病东方体合肥分离株截短56 kDa外膜蛋白基因工程纯化抗原,并鉴定其免疫学活性,为进一步研制广谱诊断试剂、疫苗以及分析其在东方体致病的分子机制奠定基础.我们通过DNAStar和Mega等软件对含有440个氨基酸的合肥株56 kDa蛋白序列进行抗原性分析;将合肥株56 kDa截短蛋白基因克隆至原核表达载体pET28a获重组质粒,转入大肠杆菌E.coli BL21感受态中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析检测蛋白表达;采用亲和层析法纯化目的蛋白,Western-blot及ELISA法鉴定其免疫学活性.序列分析发现合肥分离株56 kDa蛋白可分为4个保守区和3个可变区,抗原性分析结果显示,其保守区的亲水性和抗原性均有很高峰值.SDS-PAGE电泳显示约56 kDa的目的重组蛋白表达条带,Western-blot分析显示该重组蛋白可与恙虫病病人血清反应,阴性血清则未出现相应印迹,ELISA分析结果显示该蛋白最低浓度为80 ng/μL时仍可检出阳性血清;5μg/mL蛋白可检测阳性血清滴度高达1∶12 800,证实其具有较强反应原性.本实验获得恙虫病东方体合肥株56 kDa截短外膜蛋白基因工程抗原具有良好的抗原活性,有望进一步应用于恙虫病的诊断、疫苗研制及致病机制分析.
本文穫得恙蟲病東方體閤肥分離株截短56 kDa外膜蛋白基因工程純化抗原,併鑒定其免疫學活性,為進一步研製廣譜診斷試劑、疫苗以及分析其在東方體緻病的分子機製奠定基礎.我們通過DNAStar和Mega等軟件對含有440箇氨基痠的閤肥株56 kDa蛋白序列進行抗原性分析;將閤肥株56 kDa截短蛋白基因剋隆至原覈錶達載體pET28a穫重組質粒,轉入大腸桿菌E.coli BL21感受態中,經IPTG誘導,SDS-PAGE電泳分析檢測蛋白錶達;採用親和層析法純化目的蛋白,Western-blot及ELISA法鑒定其免疫學活性.序列分析髮現閤肥分離株56 kDa蛋白可分為4箇保守區和3箇可變區,抗原性分析結果顯示,其保守區的親水性和抗原性均有很高峰值.SDS-PAGE電泳顯示約56 kDa的目的重組蛋白錶達條帶,Western-blot分析顯示該重組蛋白可與恙蟲病病人血清反應,陰性血清則未齣現相應印跡,ELISA分析結果顯示該蛋白最低濃度為80 ng/μL時仍可檢齣暘性血清;5μg/mL蛋白可檢測暘性血清滴度高達1∶12 800,證實其具有較彊反應原性.本實驗穫得恙蟲病東方體閤肥株56 kDa截短外膜蛋白基因工程抗原具有良好的抗原活性,有望進一步應用于恙蟲病的診斷、疫苗研製及緻病機製分析.
본문획득양충병동방체합비분리주절단56 kDa외막단백기인공정순화항원,병감정기면역학활성,위진일보연제엄보진단시제、역묘이급분석기재동방체치병적분자궤제전정기출.아문통과DNAStar화Mega등연건대함유440개안기산적합비주56 kDa단백서렬진행항원성분석;장합비주56 kDa절단단백기인극륭지원핵표체재체pET28a획중조질립,전입대장간균E.coli BL21감수태중,경IPTG유도,SDS-PAGE전영분석검측단백표체;채용친화층석법순화목적단백,Western-blot급ELISA법감정기면역학활성.서렬분석발현합비분리주56 kDa단백가분위4개보수구화3개가변구,항원성분석결과현시,기보수구적친수성화항원성균유흔고봉치.SDS-PAGE전영현시약56 kDa적목적중조단백표체조대,Western-blot분석현시해중조단백가여양충병병인혈청반응,음성혈청칙미출현상응인적,ELISA분석결과현시해단백최저농도위80 ng/μL시잉가검출양성혈청;5μg/mL단백가검측양성혈청적도고체1∶12 800,증실기구유교강반응원성.본실험획득양충병동방체합비주56 kDa절단외막단백기인공정항원구유량호적항원활성,유망진일보응용우양충병적진단、역묘연제급치병궤제분석.
