复旦学报（医学版）
複旦學報（醫學版）
복단학보（의학판）
FUDAN UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCES
2008年
4期
483-488,493
,共7页
顾晓冬%洪军%项建斌%陈宗祐
顧曉鼕%洪軍%項建斌%陳宗祐
고효동%홍군%항건빈%진종우
慢病毒%CD80%CD86%RNA干扰%树突状细胞
慢病毒%CD80%CD86%RNA榦擾%樹突狀細胞
만병독%CD80%CD86%RNA간우%수돌상세포
目的 构建小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒表达载体,并在体外观察其对小鼠骨髓源性树突状细胞(dendritic cell,DC)的作用.方法 针对已经筛选确定的CD80基因RNA干扰有效靶序列,合成靶序列的双链DNA,接入pGCL-GFP载体,再与pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度;同法构建出CD86基因RNA干扰慢病毒载体.慢病毒感染体外培养的DC,通过荧光显微镜检测感染效率,Annexin V/PI双染色法检测感染细胞凋亡和坏死情况,流式细胞仪检测CD80和CD86的表达情况.结果 PCR和测序证实,pGCL-CD80 shRNA和pGCL-CD86 shRNA慢病毒载体构建正确,病毒滴度均达2×107 TU/mL,适合感染DC的MOI值为20,此时慢病毒对DC具有低毒性,感染效率为85.42%.CD80和CD86表达的抑制率分别为82.05% 和77.78%.结论 成功构建出小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体,其有明显抑制DC表面CD80和CD86的表达,这为移植物排斥提供了新的治疗手段.
目的 構建小鼠CD80和CD86基因RNA榦擾慢病毒錶達載體,併在體外觀察其對小鼠骨髓源性樹突狀細胞(dendritic cell,DC)的作用.方法 針對已經篩選確定的CD80基因RNA榦擾有效靶序列,閤成靶序列的雙鏈DNA,接入pGCL-GFP載體,再與pHelper1.0和pHelper2.0質粒共轉染293T細胞,包裝產生慢病毒,以293T細胞GFP蛋白的錶達水平測定病毒滴度;同法構建齣CD86基因RNA榦擾慢病毒載體.慢病毒感染體外培養的DC,通過熒光顯微鏡檢測感染效率,Annexin V/PI雙染色法檢測感染細胞凋亡和壞死情況,流式細胞儀檢測CD80和CD86的錶達情況.結果 PCR和測序證實,pGCL-CD80 shRNA和pGCL-CD86 shRNA慢病毒載體構建正確,病毒滴度均達2×107 TU/mL,適閤感染DC的MOI值為20,此時慢病毒對DC具有低毒性,感染效率為85.42%.CD80和CD86錶達的抑製率分彆為82.05% 和77.78%.結論 成功構建齣小鼠CD80和CD86基因RNA榦擾慢病毒載體,其有明顯抑製DC錶麵CD80和CD86的錶達,這為移植物排斥提供瞭新的治療手段.
목적 구건소서CD80화CD86기인RNA간우만병독표체재체,병재체외관찰기대소서골수원성수돌상세포(dendritic cell,DC)적작용.방법 침대이경사선학정적CD80기인RNA간우유효파서렬,합성파서렬적쌍련DNA,접입pGCL-GFP재체,재여pHelper1.0화pHelper2.0질립공전염293T세포,포장산생만병독,이293T세포GFP단백적표체수평측정병독적도;동법구건출CD86기인RNA간우만병독재체.만병독감염체외배양적DC,통과형광현미경검측감염효솔,Annexin V/PI쌍염색법검측감염세포조망화배사정황,류식세포의검측CD80화CD86적표체정황.결과 PCR화측서증실,pGCL-CD80 shRNA화pGCL-CD86 shRNA만병독재체구건정학,병독적도균체2×107 TU/mL,괄합감염DC적MOI치위20,차시만병독대DC구유저독성,감염효솔위85.42%.CD80화CD86표체적억제솔분별위82.05% 화77.78%.결론 성공구건출소서CD80화CD86기인RNA간우만병독재체,기유명현억제DC표면CD80화CD86적표체,저위이식물배척제공료신적치료수단.
