CAJ | 학술논문

目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鏊定重组抗体特性.方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体.以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性.超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白.通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western bloning和间接竞争EUSA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定.结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%.以1 mol/L尿素洗涤包涵体,6 mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%.Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应.间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35 ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应.结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础.
목적:원핵표체항극륜특라중조단련항체,대표체적포함체단백진행제취화순화,병오정중조항체특성.방법:통과온도유도대장간균표체항극륜특라단련항체,초성파쇄균체세포,채용불동세조용액제취포함체.이불동변성제용해포함체,Ni-NTA친화주순화후,경맥충희석법장기복성.초려급투석농축단백복성액,경Ni-NTA친화주이차순화,득도순화중조목적단백.통과SDS-PAGE전영분석중조목적단백순도,채용Western bloning화간접경쟁EUSA대소제비적항극륜특라중조단련항체특이성진행감정.결과:이대장간균Es-cherichia coli BL21(DE3)위숙주균유도표체중조단련항체,산솔최고,점균체단백적31%.이1 mol/L뇨소세조포함체,6 mol/L염산고위변성제,경Ni-NTA친화주순화,소득복성중조단련항체단백적순도체96%.Western blotting분석현시,순화병복성후적단련항체가여서항His표첨단백단극륭항체발생특이성적결합반응.간접경쟁ELSIA결과표명,해중조항체IC50치위3.35 ng/mL,여사정알순등결구유사물무교차반응.결론:원핵표체제비적항극륜특라중조단련항체구유교호적항원결합활성급특이성,위진일보개전극륜특라적면역쾌속검측연구전정기출.