中国血吸虫病防治杂志
中國血吸蟲病防治雜誌
중국혈흡충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF SCHISTOSOMIASIS CONTROL
2013年
3期
246-249
,共4页
罗荣%郭素霞%石耀军%程国锋
囉榮%郭素霞%石耀軍%程國鋒
라영%곽소하%석요군%정국봉
日本血吸虫%启动子%基因操作%报告基因%克隆
日本血吸蟲%啟動子%基因操作%報告基因%剋隆
일본혈흡충%계동자%기인조작%보고기인%극륭
Schistosoma japonicum%Promoter%Genetic manipulation%Reporter gene%Clone
目的 比较4个日本血吸虫基因启动子相关序列对荧光素报告基因的表达情况.方法 利用PCR技术扩增4个日本血吸虫基因启动子的相关序列,并利用常规分子生物学技术将PCR产物克隆到荧光素酶报告基因的上游.利用脂质体转染和电穿孔技术将纯化的重组质粒分别转染到HEK293细胞和日本血吸虫体内,并以荧光素酶检测系统测定了报告基因表达情况.结果 PCR扩增获得了日本血吸虫卵壳蛋白(Eggshell protein,ESG-2A)、延伸因子1(Elongation factor 1 alpha 1,EF)、烯醇酶(Enolase,EN)和抱雌沟蛋白(Gynecophornal canal protein,GCP)基因的启动子相关序列,并将它们成功地克隆到pGlu-Basic载体.重组质粒转染表明4个日本血吸虫启动子相关序列均可驱动荧光素酶报告基因在HEK293细胞和日本血吸虫虫体表达.其中含有GCP和EN启动子相关序列的重组质粒可在HEK293细胞及其培养基中检测到较高的荧光素酶活性,含有GCP和ESG的重组质粒可在日本血吸虫虫体培养基中检测到较高的荧光素酶活性.结论 获得的4个日本血吸虫启动子相关序列均可驱动荧光素酶报告基因在HEK293细胞和日本血吸虫虫体表达,为进一步利用这些启动子相关序列开展血吸虫基因操作研究奠定了初步基础.
目的 比較4箇日本血吸蟲基因啟動子相關序列對熒光素報告基因的錶達情況.方法 利用PCR技術擴增4箇日本血吸蟲基因啟動子的相關序列,併利用常規分子生物學技術將PCR產物剋隆到熒光素酶報告基因的上遊.利用脂質體轉染和電穿孔技術將純化的重組質粒分彆轉染到HEK293細胞和日本血吸蟲體內,併以熒光素酶檢測繫統測定瞭報告基因錶達情況.結果 PCR擴增穫得瞭日本血吸蟲卵殼蛋白(Eggshell protein,ESG-2A)、延伸因子1(Elongation factor 1 alpha 1,EF)、烯醇酶(Enolase,EN)和抱雌溝蛋白(Gynecophornal canal protein,GCP)基因的啟動子相關序列,併將它們成功地剋隆到pGlu-Basic載體.重組質粒轉染錶明4箇日本血吸蟲啟動子相關序列均可驅動熒光素酶報告基因在HEK293細胞和日本血吸蟲蟲體錶達.其中含有GCP和EN啟動子相關序列的重組質粒可在HEK293細胞及其培養基中檢測到較高的熒光素酶活性,含有GCP和ESG的重組質粒可在日本血吸蟲蟲體培養基中檢測到較高的熒光素酶活性.結論 穫得的4箇日本血吸蟲啟動子相關序列均可驅動熒光素酶報告基因在HEK293細胞和日本血吸蟲蟲體錶達,為進一步利用這些啟動子相關序列開展血吸蟲基因操作研究奠定瞭初步基礎.
목적 비교4개일본혈흡충기인계동자상관서렬대형광소보고기인적표체정황.방법 이용PCR기술확증4개일본혈흡충기인계동자적상관서렬,병이용상규분자생물학기술장PCR산물극륭도형광소매보고기인적상유.이용지질체전염화전천공기술장순화적중조질립분별전염도HEK293세포화일본혈흡충체내,병이형광소매검측계통측정료보고기인표체정황.결과 PCR확증획득료일본혈흡충란각단백(Eggshell protein,ESG-2A)、연신인자1(Elongation factor 1 alpha 1,EF)、희순매(Enolase,EN)화포자구단백(Gynecophornal canal protein,GCP)기인적계동자상관서렬,병장타문성공지극륭도pGlu-Basic재체.중조질립전염표명4개일본혈흡충계동자상관서렬균가구동형광소매보고기인재HEK293세포화일본혈흡충충체표체.기중함유GCP화EN계동자상관서렬적중조질립가재HEK293세포급기배양기중검측도교고적형광소매활성,함유GCP화ESG적중조질립가재일본혈흡충충체배양기중검측도교고적형광소매활성.결론 획득적4개일본혈흡충계동자상관서렬균가구동형광소매보고기인재HEK293세포화일본혈흡충충체표체,위진일보이용저사계동자상관서렬개전혈흡충기인조작연구전정료초보기출.
