sCAR-PPAb基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化
sCAR-PPAb기인적원핵표체재체구건급중조단백적표체순화
Construction of Prokaryotic Expression Vector and Prokaryotic Expression, Purification of sCAR-PPAb
  • 万方数据
    浙江理工大学学报 절강리공대학학보
    JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
    2010年 2期 318-322 ,共5页

    李娜%王双辉%岳学田%张艳红%仰毅%武玉梅%李新%牛娜%李恭楚

    리나%왕쌍휘%악학전%장염홍%앙의%무옥매%리신%우나%리공초

    PPA%sCAR-PPAb融合蛋白%亲和层析 PPA%sCAR-PPAb融閤蛋白%親和層析
    PPA%sCAR-PPAb융합단백%친화층석
    为获得腺病毒受体sCAR与掌叶半夏蛋白(PPA)的亚基B(PPAb)的融合蛋白,将PPAb基因克隆入已构建的原核表达载体pQE30-sCAR中,经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pQE30-sCAR-PPAb,转化大肠杆菌M15后获得工程菌.该菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签以包涵体形式存在的融合蛋白sCAR-PPAb.包涵体经过尿素变性溶解、PBS稀释复性、Ni离子亲和层析柱纯化,获得目的蛋白.SDS-PAGE及Western blotting分析表明,在42 kD左右有一条明显的特异性蛋白条带.同时细胞实验结果表明融合蛋白sCAR-PPAb能提高Ad-EGFP对Kasumi-1的感染效率.
    위획득선병독수체sCAR여장협반하단백(PPA)적아기B(PPAb)적융합단백,장PPAb기인극륭입이구건적원핵표체재체pQE30-sCAR중,경PCR화측서감정정학적중조질립pQE30-sCAR-PPAb,전화대장간균M15후획득공정균.해균주경IPTG유도후,고효표체출대유조안산표첨이포함체형식존재적융합단백sCAR-PPAb.포함체경과뇨소변성용해、PBS희석복성、Ni리자친화층석주순화,획득목적단백.SDS-PAGE급Western blotting분석표명,재42 kD좌우유일조명현적특이성단백조대.동시세포실험결과표명융합단백sCAR-PPAb능제고Ad-EGFP대Kasumi-1적감염효솔.
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