浙江理工大学学报
浙江理工大學學報
절강리공대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG SCI-TECH UNIVERSITY
2010年
2期
313-317
,共5页
FLAG融合标签%免疫吸附纯化%抗-FLAG单克隆抗体M2%亲和常数
FLAG融閤標籤%免疫吸附純化%抗-FLAG單剋隆抗體M2%親和常數
FLAG융합표첨%면역흡부순화%항-FLAG단극륭항체M2%친화상수
FLAG融合标签是由8个氨基酸组成的短肽,可用于重组蛋白的免疫吸附纯化.为了建立一个基于FLAG融合标签的共表达纯化体系,将2个新的FLAG标签序列DYKDYKDYK和DYKDEDDK与FLAG标签的原有序列DYKDDDDK分别命名为FLAG1、FLAG2和FLAG3,利用PCR将FLAG标签融合到SHP2酪氨酸磷酸酶NSH2结构域序列的C端,并将其重组到原核表达载体pGEX-2T中,并在大肠杆菌中进行表达.利用GST亲和层析柱和分子筛层析柱纯化融合蛋白,Western blotting法检测其免疫活性.免疫印迹结果表明,3个FLAG融合标签都可以被抗-FLAG单克隆抗体M2 (AFM2)特异性识别.利用ELISA技术测定3个FLAG标签与AFM2的亲和常数(1/Kd),其Kd值分别为0.1438、0.1281、0.0801 μmol/L.
FLAG融閤標籤是由8箇氨基痠組成的短肽,可用于重組蛋白的免疫吸附純化.為瞭建立一箇基于FLAG融閤標籤的共錶達純化體繫,將2箇新的FLAG標籤序列DYKDYKDYK和DYKDEDDK與FLAG標籤的原有序列DYKDDDDK分彆命名為FLAG1、FLAG2和FLAG3,利用PCR將FLAG標籤融閤到SHP2酪氨痠燐痠酶NSH2結構域序列的C耑,併將其重組到原覈錶達載體pGEX-2T中,併在大腸桿菌中進行錶達.利用GST親和層析柱和分子篩層析柱純化融閤蛋白,Western blotting法檢測其免疫活性.免疫印跡結果錶明,3箇FLAG融閤標籤都可以被抗-FLAG單剋隆抗體M2 (AFM2)特異性識彆.利用ELISA技術測定3箇FLAG標籤與AFM2的親和常數(1/Kd),其Kd值分彆為0.1438、0.1281、0.0801 μmol/L.
FLAG융합표첨시유8개안기산조성적단태,가용우중조단백적면역흡부순화.위료건립일개기우FLAG융합표첨적공표체순화체계,장2개신적FLAG표첨서렬DYKDYKDYK화DYKDEDDK여FLAG표첨적원유서렬DYKDDDDK분별명명위FLAG1、FLAG2화FLAG3,이용PCR장FLAG표첨융합도SHP2락안산린산매NSH2결구역서렬적C단,병장기중조도원핵표체재체pGEX-2T중,병재대장간균중진행표체.이용GST친화층석주화분자사층석주순화융합단백,Western blotting법검측기면역활성.면역인적결과표명,3개FLAG융합표첨도가이피항-FLAG단극륭항체M2 (AFM2)특이성식별.이용ELISA기술측정3개FLAG표첨여AFM2적친화상수(1/Kd),기Kd치분별위0.1438、0.1281、0.0801 μmol/L.
