放射免疫学杂志
放射免疫學雜誌
방사면역학잡지
JOURNAL OF RADIOMMUNOLOGY
2010年
1期
79-81
,共3页
BCR/ABL融合基因%pUCm-T载体%T-A克隆法%实时定量PCR
BCR/ABL融閤基因%pUCm-T載體%T-A剋隆法%實時定量PCR
BCR/ABL융합기인%pUCm-T재체%T-A극륭법%실시정량PCR
目的:用T-A克隆法构建含BCR/ABL融合基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQ-PCR)方法制备标准品.方法:通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳胶回收纯化,T-A克隆与pUCm-T载体连接,转染DHSa菌,蓝白斑筛选阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQ-PCR,最后制得BCR/ABL的重组质粒标准品.结果:蓝白斑筛选实验、PCR扩增均证实BCR/ABL融合基因重组到pUCm-T载体上,经RQ-PCR定量后得到BCR/ABL重组质粒标准品的标准曲线.结论:该方法能大量制备质粒标准品,并且可被推广应用.
目的:用T-A剋隆法構建含BCR/ABL融閤基因的重組質粒,併用實時定量PCR(RQ-PCR)方法製備標準品.方法:通過培養細胞,提取總RNA併逆轉錄為cDNA後做PCR,電泳膠迴收純化,T-A剋隆與pUCm-T載體連接,轉染DHSa菌,藍白斑篩選暘性菌落後,大量提取質粒,再進行RQ-PCR,最後製得BCR/ABL的重組質粒標準品.結果:藍白斑篩選實驗、PCR擴增均證實BCR/ABL融閤基因重組到pUCm-T載體上,經RQ-PCR定量後得到BCR/ABL重組質粒標準品的標準麯線.結論:該方法能大量製備質粒標準品,併且可被推廣應用.
목적:용T-A극륭법구건함BCR/ABL융합기인적중조질립,병용실시정량PCR(RQ-PCR)방법제비표준품.방법:통과배양세포,제취총RNA병역전록위cDNA후주PCR,전영효회수순화,T-A극륭여pUCm-T재체련접,전염DHSa균,람백반사선양성균락후,대량제취질립,재진행RQ-PCR,최후제득BCR/ABL적중조질립표준품.결과:람백반사선실험、PCR확증균증실BCR/ABL융합기인중조도pUCm-T재체상,경RQ-PCR정량후득도BCR/ABL중조질립표준품적표준곡선.결론:해방법능대량제비질립표준품,병차가피추엄응용.
