农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2010年
1期
61-65
,共5页
刘文强%曹晖%殷吉庆%云彦%华进联%雷安民
劉文彊%曹暉%慇吉慶%雲彥%華進聯%雷安民
류문강%조휘%은길경%운언%화진련%뢰안민
Oct4%生殖细胞%转染
Oct4%生殖細胞%轉染
Oct4%생식세포%전염
Oct4%Germ cells%Transfection
本研究通过PCR方法从小鼠(Mus musculus)基因组中扩增出Oct4启动子的CR4区和CR1区,将其克隆到真核报告载体pEGFP-1,构建了携带Dct4启动子片段的小鼠生殖细胞特异性报告载体CR1,4-pEGFP-1.用该载体转染多种细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(EGFP)在细胞中的表达情况,同时以半定量RT-PCR检测转染细胞中Oct4及其它生殖细胞特异性基因的转录情况.结果显示,GFP在小鼠胚胎干细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和C2C12细胞中均不表达,而在P19细胞和睾丸细胞中表达.RT-PCR结果显示,Oct4在P19、睾丸细胞和生殖干细胞中特异性转录.这表明所构建的绿色荧光蛋白报告载体只在生殖细胞和多能生殖干细胞中内表达,该质粒可作为示踪生殖细胞的工具,同时也可以作为生殖干细胞多能性状态的一个监测标记.
本研究通過PCR方法從小鼠(Mus musculus)基因組中擴增齣Oct4啟動子的CR4區和CR1區,將其剋隆到真覈報告載體pEGFP-1,構建瞭攜帶Dct4啟動子片段的小鼠生殖細胞特異性報告載體CR1,4-pEGFP-1.用該載體轉染多種細胞,在熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白(EGFP)在細胞中的錶達情況,同時以半定量RT-PCR檢測轉染細胞中Oct4及其它生殖細胞特異性基因的轉錄情況.結果顯示,GFP在小鼠胚胎榦細胞、小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)和C2C12細胞中均不錶達,而在P19細胞和睪汍細胞中錶達.RT-PCR結果顯示,Oct4在P19、睪汍細胞和生殖榦細胞中特異性轉錄.這錶明所構建的綠色熒光蛋白報告載體隻在生殖細胞和多能生殖榦細胞中內錶達,該質粒可作為示蹤生殖細胞的工具,同時也可以作為生殖榦細胞多能性狀態的一箇鑑測標記.
본연구통과PCR방법종소서(Mus musculus)기인조중확증출Oct4계동자적CR4구화CR1구,장기극륭도진핵보고재체pEGFP-1,구건료휴대Dct4계동자편단적소서생식세포특이성보고재체CR1,4-pEGFP-1.용해재체전염다충세포,재형광현미경하관찰록색형광단백(EGFP)재세포중적표체정황,동시이반정량RT-PCR검측전염세포중Oct4급기타생식세포특이성기인적전록정황.결과현시,GFP재소서배태간세포、소서배태성섬유세포(MEF)화C2C12세포중균불표체,이재P19세포화고환세포중표체.RT-PCR결과현시,Oct4재P19、고환세포화생식간세포중특이성전록.저표명소구건적록색형광단백보고재체지재생식세포화다능생식간세포중내표체,해질립가작위시종생식세포적공구,동시야가이작위생식간세포다능성상태적일개감측표기.
