上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2010年
1期
64-69
,共6页
赵伟鸽%单同领%朱建国%林源%华修国
趙偉鴿%單同領%硃建國%林源%華脩國
조위합%단동령%주건국%림원%화수국
猪α、γ干扰素%原核表达%纯化%抗病毒活性
豬α、γ榦擾素%原覈錶達%純化%抗病毒活性
저α、γ간우소%원핵표체%순화%항병독활성
提取猪白细胞DNA、猪脾脏RNA,特异性引物扩增猪IFN-α、IFN-γ基因,将IFN-α和IFN-γ基因分别插入原核表达载体pET-30构建重组表达质粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ,转化大肠杆菌B121,在IPTG诱导下表达猪IFN-α及IFN-γ,SDS-PAGE分析重组表达蛋白;用细胞病变抑制法检测重组表达蛋白的抗病毒活性.结果表明成功构建重组表达质粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ;SDS-PAGE可检测到相对分子质量为21.3 Ku和19.4 Ku的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在;经Ni2+-NTA亲和层析纯化,获得高纯度重组蛋白;纯化的猪IFN-α和IFN-γ抗星状病毒复制的活性分别为3.15×103 U·mg-1和2.48×103 U·mg-1.
提取豬白細胞DNA、豬脾髒RNA,特異性引物擴增豬IFN-α、IFN-γ基因,將IFN-α和IFN-γ基因分彆插入原覈錶達載體pET-30構建重組錶達質粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ,轉化大腸桿菌B121,在IPTG誘導下錶達豬IFN-α及IFN-γ,SDS-PAGE分析重組錶達蛋白;用細胞病變抑製法檢測重組錶達蛋白的抗病毒活性.結果錶明成功構建重組錶達質粒pET-30-IFN-α和pET-30-IFN-γ;SDS-PAGE可檢測到相對分子質量為21.3 Ku和19.4 Ku的蛋白條帶,錶達產物主要以包涵體形式存在;經Ni2+-NTA親和層析純化,穫得高純度重組蛋白;純化的豬IFN-α和IFN-γ抗星狀病毒複製的活性分彆為3.15×103 U·mg-1和2.48×103 U·mg-1.
제취저백세포DNA、저비장RNA,특이성인물확증저IFN-α、IFN-γ기인,장IFN-α화IFN-γ기인분별삽입원핵표체재체pET-30구건중조표체질립pET-30-IFN-α화pET-30-IFN-γ,전화대장간균B121,재IPTG유도하표체저IFN-α급IFN-γ,SDS-PAGE분석중조표체단백;용세포병변억제법검측중조표체단백적항병독활성.결과표명성공구건중조표체질립pET-30-IFN-α화pET-30-IFN-γ;SDS-PAGE가검측도상대분자질량위21.3 Ku화19.4 Ku적단백조대,표체산물주요이포함체형식존재;경Ni2+-NTA친화층석순화,획득고순도중조단백;순화적저IFN-α화IFN-γ항성상병독복제적활성분별위3.15×103 U·mg-1화2.48×103 U·mg-1.
