上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2010年
1期
14-18,52
,共6页
重组人胰岛素原%转基因烟草%糖尿病
重組人胰島素原%轉基因煙草%糖尿病
중조인이도소원%전기인연초%당뇨병
按植物偏爱密码子设计合成了228 bp带his-tag(6×his)人胰岛素原基因(hmins),随后构建了植物双元表达载体p35S::hmins(骨架质粒是pCAMBIA2300),通过冻融法导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105制备工程菌,用农杆菌介导法转化烟草叶盘.经卡那霉素(50 mg·L-1)筛选获得98株抗性植株,PCR和southern blotting分析确认获得了6株独立转基因烟草,hmins在转基因烟草基因组中的拷贝数介于2-4;RT-PCR和western blotting分析结果表明,hmins在转基因烟草中成功表达(转录和翻译水平);ELISA结果显示,hmins在转基因烟草叶片中表达量为0.5～1.1μg·g-1·FW.该研究为植物源胰岛素研制做了必要的前期准备.
按植物偏愛密碼子設計閤成瞭228 bp帶his-tag(6×his)人胰島素原基因(hmins),隨後構建瞭植物雙元錶達載體p35S::hmins(骨架質粒是pCAMBIA2300),通過凍融法導入根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105製備工程菌,用農桿菌介導法轉化煙草葉盤.經卡那黴素(50 mg·L-1)篩選穫得98株抗性植株,PCR和southern blotting分析確認穫得瞭6株獨立轉基因煙草,hmins在轉基因煙草基因組中的拷貝數介于2-4;RT-PCR和western blotting分析結果錶明,hmins在轉基因煙草中成功錶達(轉錄和翻譯水平);ELISA結果顯示,hmins在轉基因煙草葉片中錶達量為0.5～1.1μg·g-1·FW.該研究為植物源胰島素研製做瞭必要的前期準備.
안식물편애밀마자설계합성료228 bp대his-tag(6×his)인이도소원기인(hmins),수후구건료식물쌍원표체재체p35S::hmins(골가질립시pCAMBIA2300),통과동융법도입근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)EHA105제비공정균,용농간균개도법전화연초협반.경잡나매소(50 mg·L-1)사선획득98주항성식주,PCR화southern blotting분석학인획득료6주독립전기인연초,hmins재전기인연초기인조중적고패수개우2-4;RT-PCR화western blotting분석결과표명,hmins재전기인연초중성공표체(전록화번역수평);ELISA결과현시,hmins재전기인연초협편중표체량위0.5～1.1μg·g-1·FW.해연구위식물원이도소연제주료필요적전기준비.
