同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2010年
1期
35-39
,共5页
张良平%范慧敏%刘中民%陈炳官%汤家铭
張良平%範慧敏%劉中民%陳炳官%湯傢銘
장량평%범혜민%류중민%진병관%탕가명
心衰%乙酰胆碱敏感性钾通道%基因打靶%胚胎干细胞%转基因小鼠%模式动物
心衰%乙酰膽堿敏感性鉀通道%基因打靶%胚胎榦細胞%轉基因小鼠%模式動物
심쇠%을선담감민감성갑통도%기인타파%배태간세포%전기인소서%모식동물
目的 建立Kcnj5基因敲除小鼠模型,构建病理生理或药理实验平台,以确定钾通道和东莨菪碱等药物和心衰治疗的关系.方法 用细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)载体构建了Kcnj 5打靶载体,电穿孔到129/S6/SvEv品系雄性小鼠的胚胎干细胞SCR012后,用300 μg/ml G418、2μmol/L GanC筛选克隆8 d.打靶后的干细胞显微注射到囊胚后,生育嵌合体再交配繁育杂合子及纯合子.用PCR方法结合片段克隆后基因测序鉴定基因型.免疫组化法证实基因型的表达.结果 挑取抗性克隆96个中正确同源克隆数20个,阳性率为20.8%.显微注射C57BL/6J囊胚180枚.14只受体出生12只小鼠中得到4只大于50%嵌合率雄鼠.配育获得29只 Kir3.4+/-F1代杂合子.现繁育F4后代获得Kir3.4-/-纯合子约百只.用单抗对敲除鼠心进行免疫组化鉴定,提示纯合子敲除鼠心为阴性.结论 用同源重组法敲除了干细胞靶基因,成功建立Kir 3.4-/-建立鼠系.成功建立Kir 3.4钾通道分子病动物模型.该基因的完全缺如模型有利于隔离了该基因的作用,对与之相关的基因的进一步阻断、拮抗或激活等药物研究,也是一个很好的模型.
目的 建立Kcnj5基因敲除小鼠模型,構建病理生理或藥理實驗平檯,以確定鉀通道和東莨菪堿等藥物和心衰治療的關繫.方法 用細菌人工染色體(bacterial artificial chromosome,BAC)載體構建瞭Kcnj 5打靶載體,電穿孔到129/S6/SvEv品繫雄性小鼠的胚胎榦細胞SCR012後,用300 μg/ml G418、2μmol/L GanC篩選剋隆8 d.打靶後的榦細胞顯微註射到囊胚後,生育嵌閤體再交配繁育雜閤子及純閤子.用PCR方法結閤片段剋隆後基因測序鑒定基因型.免疫組化法證實基因型的錶達.結果 挑取抗性剋隆96箇中正確同源剋隆數20箇,暘性率為20.8%.顯微註射C57BL/6J囊胚180枚.14隻受體齣生12隻小鼠中得到4隻大于50%嵌閤率雄鼠.配育穫得29隻 Kir3.4+/-F1代雜閤子.現繁育F4後代穫得Kir3.4-/-純閤子約百隻.用單抗對敲除鼠心進行免疫組化鑒定,提示純閤子敲除鼠心為陰性.結論 用同源重組法敲除瞭榦細胞靶基因,成功建立Kir 3.4-/-建立鼠繫.成功建立Kir 3.4鉀通道分子病動物模型.該基因的完全缺如模型有利于隔離瞭該基因的作用,對與之相關的基因的進一步阻斷、拮抗或激活等藥物研究,也是一箇很好的模型.
목적 건립Kcnj5기인고제소서모형,구건병리생리혹약리실험평태,이학정갑통도화동랑탕감등약물화심쇠치료적관계.방법 용세균인공염색체(bacterial artificial chromosome,BAC)재체구건료Kcnj 5타파재체,전천공도129/S6/SvEv품계웅성소서적배태간세포SCR012후,용300 μg/ml G418、2μmol/L GanC사선극륭8 d.타파후적간세포현미주사도낭배후,생육감합체재교배번육잡합자급순합자.용PCR방법결합편단극륭후기인측서감정기인형.면역조화법증실기인형적표체.결과 도취항성극륭96개중정학동원극륭수20개,양성솔위20.8%.현미주사C57BL/6J낭배180매.14지수체출생12지소서중득도4지대우50%감합솔웅서.배육획득29지 Kir3.4+/-F1대잡합자.현번육F4후대획득Kir3.4-/-순합자약백지.용단항대고제서심진행면역조화감정,제시순합자고제서심위음성.결론 용동원중조법고제료간세포파기인,성공건립Kir 3.4-/-건립서계.성공건립Kir 3.4갑통도분자병동물모형.해기인적완전결여모형유리우격리료해기인적작용,대여지상관적기인적진일보조단、길항혹격활등약물연구,야시일개흔호적모형.
