生命科学研究
生命科學研究
생명과학연구
LIFE SCIENCE RESEARCH
2010年
1期
21-26
,共6页
张云龙%陈格飞%陈国亮%林森珠%张蒙恩%孟清
張雲龍%陳格飛%陳國亮%林森珠%張矇恩%孟清
장운룡%진격비%진국량%림삼주%장몽은%맹청
大腹圆蛛%Fosmid文库%牵引丝%MaSp基因
大腹圓蛛%Fosmid文庫%牽引絲%MaSp基因
대복원주%Fosmid문고%견인사%MaSp기인
Araneus ventricosus%Fosmid library%dragline silk%MaSp gene
介绍了构建大腹圆蛛Fosmid基因组文库及牵引丝蛋白(MaSp)基因克隆筛选的全过程.采用改良CTAB法提取大片段基因组DNA.通过自主构建的电洗脱核酸回收装置分离回收30-40 kb DNA片段,经补平磷酸化、与pCC2FOS栽体连接、体外包装和转染EPI300~(TM)-T1~R,首次构建了无偏向性的大腹圆蛛Fosmid文库,其滴度为4.5×10~5 cfu,mL,覆盖基因组倍数为10.以α-~(32)P标记寡核苷酸探针对文库进行初步筛选,获得含MaSp基因的12个阳性克隆.该文库符合Fosmid文库的品质要求.为进一步筛选并研究大腹圆蛛MaSp基因序列奠定了基础.
介紹瞭構建大腹圓蛛Fosmid基因組文庫及牽引絲蛋白(MaSp)基因剋隆篩選的全過程.採用改良CTAB法提取大片段基因組DNA.通過自主構建的電洗脫覈痠迴收裝置分離迴收30-40 kb DNA片段,經補平燐痠化、與pCC2FOS栽體連接、體外包裝和轉染EPI300~(TM)-T1~R,首次構建瞭無偏嚮性的大腹圓蛛Fosmid文庫,其滴度為4.5×10~5 cfu,mL,覆蓋基因組倍數為10.以α-~(32)P標記寡覈苷痠探針對文庫進行初步篩選,穫得含MaSp基因的12箇暘性剋隆.該文庫符閤Fosmid文庫的品質要求.為進一步篩選併研究大腹圓蛛MaSp基因序列奠定瞭基礎.
개소료구건대복원주Fosmid기인조문고급견인사단백(MaSp)기인극륭사선적전과정.채용개량CTAB법제취대편단기인조DNA.통과자주구건적전세탈핵산회수장치분리회수30-40 kb DNA편단,경보평린산화、여pCC2FOS재체련접、체외포장화전염EPI300~(TM)-T1~R,수차구건료무편향성적대복원주Fosmid문고,기적도위4.5×10~5 cfu,mL,복개기인조배수위10.이α-~(32)P표기과핵감산탐침대문고진행초보사선,획득함MaSp기인적12개양성극륭.해문고부합Fosmid문고적품질요구.위진일보사선병연구대복원주MaSp기인서렬전정료기출.
