畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
3期
77-81
,共5页
郑其升%徐公豹%邓碧华%何家惠%侯继波
鄭其升%徐公豹%鄧碧華%何傢惠%侯繼波
정기승%서공표%산벽화%하가혜%후계파
禽流感病毒%M2e%多肽%间接ELISA
禽流感病毒%M2e%多肽%間接ELISA
금류감병독%M2e%다태%간접ELISA
本研究人工合成禽流感病毒H5Nl亚型M2蛋白的膜外区(M2e),并偶联至半抗原载体血蓝蛋白(KLH),免疫SPF鸡,共免疫3次,每次间隔两周.所获得的阴阳性血清用于ELISA方法的建立,通过方阵滴定确定了人工合成的23肽包被96孔ELISA板的最佳浓度为5μg/mL;1%BSA为封闭液,37℃封闭3 h;被检测血清的最佳稀释度为1:400,一抗反应时间为37℃,45 min;二抗反应时间为37℃30 min;选用TMB为底物,显色15 min,用2 mol/L H2SO4为终止液为检测血清中抗M2e抗体滴度奠定基础.根据建立的ELISA方法,检测3次免疫2周后的SPF鸡血清中抗M2e抗体,血清开始1:100倍稀释之后做倍比稀释,测得平均滴度分别为1:13 500和1:20 500.
本研究人工閤成禽流感病毒H5Nl亞型M2蛋白的膜外區(M2e),併偶聯至半抗原載體血藍蛋白(KLH),免疫SPF鷄,共免疫3次,每次間隔兩週.所穫得的陰暘性血清用于ELISA方法的建立,通過方陣滴定確定瞭人工閤成的23肽包被96孔ELISA闆的最佳濃度為5μg/mL;1%BSA為封閉液,37℃封閉3 h;被檢測血清的最佳稀釋度為1:400,一抗反應時間為37℃,45 min;二抗反應時間為37℃30 min;選用TMB為底物,顯色15 min,用2 mol/L H2SO4為終止液為檢測血清中抗M2e抗體滴度奠定基礎.根據建立的ELISA方法,檢測3次免疫2週後的SPF鷄血清中抗M2e抗體,血清開始1:100倍稀釋之後做倍比稀釋,測得平均滴度分彆為1:13 500和1:20 500.
본연구인공합성금류감병독H5Nl아형M2단백적막외구(M2e),병우련지반항원재체혈람단백(KLH),면역SPF계,공면역3차,매차간격량주.소획득적음양성혈청용우ELISA방법적건립,통과방진적정학정료인공합성적23태포피96공ELISA판적최가농도위5μg/mL;1%BSA위봉폐액,37℃봉폐3 h;피검측혈청적최가희석도위1:400,일항반응시간위37℃,45 min;이항반응시간위37℃30 min;선용TMB위저물,현색15 min,용2 mol/L H2SO4위종지액위검측혈청중항M2e항체적도전정기출.근거건립적ELISA방법,검측3차면역2주후적SPF계혈청중항M2e항체,혈청개시1:100배희석지후주배비희석,측득평균적도분별위1:13 500화1:20 500.
