外源抗草甘膦EPSPs基因在大豆基因组中的整合与定位
외원항초감련EPSPs기인재대두기인조중적정합여정위
Integration and Insertion Site of EPSPs Gene on the Soybean Genome in Genetically Modified Glyphosate-Resistant Soybean
  • 万方数据
    作物学报 작물학보
    ACTA AGRONOMICA SINICA
    2010年 3期 365-375 ,共11页

    王晓波%蒋凌雪%魏利%刘林%陆伟%李文欣%王俊%陶波%常汝镇%邱丽娟

    왕효파%장릉설%위리%류림%륙위%리문흔%왕준%도파%상여진%구려연

    转基因大豆%插人位点%基因组%EPSPs%抗草甘膦%定位%侧翼序列 轉基因大豆%插人位點%基因組%EPSPs%抗草甘膦%定位%側翼序列
    전기인대두%삽인위점%기인조%EPSPs%항초감련%정위%측익서렬
    Genetically modified soybean%Insertion locus%Genome%EPSPs%Glyphosate-Resistance%Location%Flanking sequence
    通过基因特异引物扩增和免疫层析试纸法分别对转基因大豆中外源EPSPs基因和其编码的蛋白进行检测,结果表明,EPSPs基因不仅已整合到大豆基因组中,而且EPSPs蛋白可以正常表达.利用染色体步移法获得了转基因大豆插入位点的侧翼序列,序列比对表明35S上游的大豆DNA序列起始于Gm02:7912740,NOS下游的大豆DNA序列起始于Gm02:7777705.在本研究检测序列范围内发现插入位点两侧不同位置有3个不同的未知片段、2个大豆基因组序列倒位,同时发现2个大豆基因组片段丢失.外源基因不是以点插入方式整合,而是导致大豆基因组约135kb片段的移位;NOS下游大豆基因组序列发生重排,导致一个编码HEC1和HEAT repeat两个功能域的基因(Glyma02g09790)结构受到影响,首次发现该基因在ABA和PEG处理时下调表达,推测该基因通过ABA信号通路参与胁迫应答.本研究通过对抗除草剂EPSPs基因在大豆基因组中的插入位点分析,明确了外源EPSPs基因在大豆基因组中的整合、定位及其侧翼序列,为转基因大豆安全评价提供了依据.
    통과기인특이인물확증화면역층석시지법분별대전기인대두중외원EPSPs기인화기편마적단백진행검측,결과표명,EPSPs기인불부이정합도대두기인조중,이차EPSPs단백가이정상표체.이용염색체보이법획득료전기인대두삽입위점적측익서렬,서렬비대표명35S상유적대두DNA서렬기시우Gm02:7912740,NOS하유적대두DNA서렬기시우Gm02:7777705.재본연구검측서렬범위내발현삽입위점량측불동위치유3개불동적미지편단、2개대두기인조서렬도위,동시발현2개대두기인조편단주실.외원기인불시이점삽입방식정합,이시도치대두기인조약135kb편단적이위;NOS하유대두기인조서렬발생중배,도치일개편마HEC1화HEAT repeat량개공능역적기인(Glyma02g09790)결구수도영향,수차발현해기인재ABA화PEG처리시하조표체,추측해기인통과ABA신호통로삼여협박응답.본연구통과대항제초제EPSPs기인재대두기인조중적삽입위점분석,명학료외원EPSPs기인재대두기인조중적정합、정위급기측익서렬,위전기인대두안전평개제공료의거.
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